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　　单分散羧基化聚苯乙烯微球的制备:

　　以分散聚合制备的直径2μm左右的聚苯乙烯微球为种子,通过种子聚合的方法制备了粒径在5-15μm的羧基化聚苯乙烯微球,并对种子聚合的机理,共聚的可行性进行了探讨,同时探索了单体溶胀时间,苯乙烯的加入量,甲基丙烯酸的加入量等反应条件对微球粒径和形貌的影响;通过酶联免疫反应评价了微球的表面反应能力和羧基的活性.

　　结果如图8所示，将细胞培养4小时后，用空白pmaa纳米凝胶(根据实施例16制备)处理的细胞未观察到荧光，而p(cpt-maa)前纳米凝胶组可在1小时至4小时内逐渐观察到蓝荧光，表明p(cpt-maa)前纳米凝胶可被hepg2细胞成功摄取。此外，蓝荧光不能与红荧光重叠，表明纳米凝胶可以从晚期内体和溶酶体中逃逸并进入细胞质，然后通过高含量的gsh和癌细胞的细胞质中的低ph水平，可以触发cpt释放。

　　试验例2体外细胞毒性测试选择人肝癌细胞hepg2和成纤维细胞l929以研究纳米凝胶的细胞毒性。将细胞在含有10％fbs和抗生素(青霉素和链霉素，100u/ml)的dmem培养基中，于37℃在含有5％co2的潮湿气氛中温育。

　　使用mtt测定法在l929细胞和hepg2细胞上测试细胞毒性。简而言之，将对数期的细胞接种到96孔板中。在100μldmem中孵育24小时后，将在100μldmem中具有不同浓度的一系列p(cpt-maa)前纳米凝胶(根据实施例6制备)加入每个孔中并进一步孵育24,48和72小时。在预定时间点，用200μl新鲜dmem替换培养基，加入20μlmtt溶液(5mg/ml，在生理盐水中)。进一步温育4小时后，弃去培养基并用150μldmso替换。摇动后，通过酶标仪在570nm处测量每个孔的光密度(od)。结果在六个单独的实验中取平均值，并表示为平均值±sd。细胞活力(cv)计算如下等式:cv(％)＝od(处理的)/od(未处理的)×100％。此外，如上所述评估空白纳米凝胶(根据实施例16制备)的细胞毒性。

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　　实施例4cpt-cc-m的制备在氮气气氛下，将喜树碱(0.70g，2mmol)和三光气(0.2g，0.66mmol)共混于50ml无水二氯甲烷中，随后加入4-二甲氨基吡啶(0.73g，6mmol)，搅拌反应1小时。接着将hdoma(0.47g，2.5mmol)溶于10ml无水四氢呋喃中，逐滴加入到上述反应液中。室温下反应24小时后，过滤反应混合物，以除去不溶性盐；旋转蒸发除去溶剂。将残余物重新溶解在二氯甲烷中，分别用稀盐酸(100mmol/l)、水、饱和氯化钠溶液分别洗涤两次。收集有机层，并用无水硫酸镁干燥。浓缩上清液，以二氯甲烷/甲醇(200/1，v/v)作为洗脱液，通过二氧化硅硅胶柱分离纯化，获得淡黄的供聚合用的喜树碱单体(cpt-cc-m)。1hnmr(cdcl3，δ，ppm，tms):8.41(s，1h)，8.24(d，1h)，7.95(d，1h)，7.84(m，1h)，7.68(m，1h)，7.36(s，1h)，6.08(s，1h)，5.31(d，2h)，4.42-4.33(m，4h)，3.07-2.80(m，4h)，2.33-2.12(m，2h)，1.91(s，3h)，1.01(m，3h)。esi-msm/z:计算值为561.60；实测值为561.60[m+h]+。

　　指将物溶解在与水不混溶的有机溶剂中，聚合物可以溶解在有机相或水相，在搅拌的条件下将有机相加入水相，然后抽真空将有机相挥发。4、 溶剂挥发法

　　指将物和聚合物溶解于易挥发的有机溶剂中，再将有机溶剂挥去，形成聚合物物膜,然后通过剧烈搅拌将膜重新分散在水中。

　　指将物和聚合物溶于可用于冻干的有机溶剂(一般是叔丁醇) 后，再与水混合，冻干后聚合物胶束分散于等渗的水性介质中。