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将10 g硅胶颗粒在甲烷磺酸溶液中浸泡24 h后用丙酮和蒸馏水冲洗, 得到活化硅胶颗粒。然后, 将15 m L交联剂TTS和10 g的活化硅胶颗粒加入到200 m L体积比为1∶1的乙醇和水混合溶液中, 在50℃下反应24 h, 得到表面修饰的TTS-Si O2。3 g的TTS-Si O2和10 g的MAA加入200 m L水溶液中, 并加入引发剂过硫酸铵, 通入氮气, 并在70℃下反应7 h。获得的产物用乙醇洗去未结合的MAA。最后, 在60℃下干燥4 h得到终产物PMAA/Si O2。而PAM/Si O2的获得与上述方法类似, 只是在反应中将10 g MAA换成AM。
Barahona等[18]以噻苯咪唑 (TBZ) 为模板, 在二氧化硅颗粒表面固定引发转移终止剂, 通过活性可控自由基接枝聚合法制备SSMIP。他们将制得的SSMIP材料液作为谱固定相, 与通过沉淀聚合法制备的具有小粒径分布和核-壳形貌的印迹聚合物微球做了对比研究, 结果表明该方法具有简单、直接、所需试剂量少等优势。Li等[19]采用可逆加成-断裂链转移试剂功能化硅胶作为链转移剂, 通过表面引发可逆加成-断裂链转移 (RAFT) 聚合, 将MIP (分子印迹聚合物) 嫁接到硅胶颗粒表面, 制备了茶碱SSMIP吸附剂 (如图3所示) 。他们利用可逆加成-断裂链转移可控/活性聚合机理的内在特性对嫁接过程进行有效控制。在模板分子存在下, MAA和二乙烯基苯的接枝共聚可以在硅胶表面形成纳米级MIP薄膜 (膜厚约1.98nm) 。与本体聚合制备的茶碱MIP相比, SSMIP的传质性能明显改善。将SSMIP用于固相萃取, 其对血清中的茶碱的加标回收率在90%以上。
如图7显示,p(cpt-maa)前纳米凝胶的ic50值在48小时和72小时分别为5.93μg/ml和4.61μg/ml,略高于游离喜树碱的3.65和1.81μg/ml,但无显著性差异。试验例3癌细胞对本发明纳米凝胶的摄取实验
通过共聚焦激光扫描显微镜分析评估细胞对纳米凝胶的摄取。将处于对数期的hepg2细胞接种到具有玻璃盖的6孔板中。在2ml培养基中孵育24小时后,加入含有或不含cpt的纳米凝胶并进一步温育4小时。然后除去培养基,用冷pbs(ph7.4)洗涤细胞三次。为了同时评估纳米凝胶的内体逃逸能力,通过lyso-trackerreddnd-99进一步染细胞。然后,用4%多聚甲醛溶液固定细胞,并在clsm下用dapi通道观察纳米凝胶,tritc通道用于内体。
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聚氧乙烯-b-聚已内酯
PEO-b-PLLA
Poly(ethylene oxide-b-Lactide)聚氧乙烯-b-聚乳酸
PEO-b-PDLLA
Poly(ethylene oxide-b-D,Lactide)
聚氧乙烯-b-聚乳酸
PEO-PMAA
Poly(ethyleneoxide-b-methacrylic acid)
聚乳酸-聚已内酯-b-聚乙二醇-叶酸
PLAL-mPEG
Poly(lactide-co-allyl lactide)-b-poly(ethyleneglycol) LA:AL 50:50
聚乳酸-聚烯丙基丙交酯-b-聚乙二醇PLAL-PEG-PLAL
Poly(lactide-co-allyl lactide)-b-poly(ethyleneglycol)-Poly(lactide-co-allyl lactide) LA:AL 50:50