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分光光度计的原理及其校正与操作

时间:2016-11-09 16:08

  (一)分光光度计 (简称UV)

  一般而言,分光光度计多用于分析水中之非金属分子或离子化合物,早期仅利用到可见光谱,在于补足肉眼比色之精度不足问题,后来才发展到利用紫外光谱区,近年分析理论愈加完备,更延伸到生化领域,针对化合物中某些特殊吸光之官能基,而分析一些外观不具明显颜色之目标物。分光光度计之原理,乃是利用可见光及紫外光之灯管 (Lamp) 做为光源,通过滤光镜调整色调后,经聚焦后通过单色光分光稜镜,再经过狭缝选择波长,使成单一且特定波长之光线,而后射入样品管中之水样中,最后射入光电管中将光能转换为电器讯号,藉由样本及空白水样间所吸收之光能量差,与标准液之能量吸收值相比较,便可律定样本中之待测物浓度。

  (二)仪器的校正与操作:

  1.将〈OFF-TRANS-ABS〉闯关转至〈TRANS〉,热机15分钟以上。

  2.调整波长选择器,转至所欲设定之波长〈WAVELENGTH〉。

  3.将滤渡镜插入专用之滤波镜位置。

  4.取蒸馏水或其他空白溶液置于试管,再将试管放入测试槽中。

  5..按住〈ZERO SET 〉键,调整零点起至显示为"0.0"。

  6.放开〈ZERO SET 〉键,将开关转至〈TRANS 〉的位置。

  7.调整〈100%T/OA〉钮之粗调整〈大〉,转至数字显示接近100.0。

  8.调整〈100%T/OA〉钮之微调整〈小〉,转至数字显示100.0。

  9.重覆步骤5-8两次,以确定是否偏差。

  10.把开关转至〈ABS〉之位置。

  11..放入样品,此时读值即是〈ABS〉值。

  12.取出样品,倒掉清洗乾淨,再放入第二样品进行测试。