丽水多钱回收废钼公司电话
废钼回收的环保意义与政策支持
钼矿开采伴生重金属污染和生态破坏，而废钼回收可大幅减少环境负荷。每回收1万吨废钼，相当于减少30万吨矿石开采和10万吨二氧化碳排放。全球多国通过政策鼓励回收:欧盟将钼列为关键原材料，要求成员国提高回收率；中国《“十四五”循环经济发展规划》明确支持稀有金属再生利用。企业若通过ISO 14001认证或采用清洁生产技术（如废酸循环利用），还可获得税收优惠，进一步强化环保与经济的双赢。
钼是一种重要的金属元素，化学符号为Mo，原子序数为42。它是一种银白、有光泽的金属，密度较大，具有很高的熔点和沸点。钼是一种重要的合金元素，通常与铁、镍、铜等金属元素合金化，用于制造耐高温、耐蚀的合金材料。
钼在工业、军事、航空航天领域有着广泛的应用。例如，钼合金常被用于制造航空航天器、航空发动机、核反应堆等高温高压环境下工作的设备。此外，钼合金也用于制造汽车发动机零部件、工具刀具、石油化工设备、火箭发动机等领域。
除了作为合金元素外，钼也是重要的工业催化剂。例如，氧化钼催化剂可用于制备硫酸、磷酸、氮肥等化工产品。钼还是一种重要的冶金元素，被广泛应用于冶炼和精炼金属材料的工艺中。
钼也是人体所的微量元素。它在人体内起着重要的作用，是酶的重要组成成分，参与机体的能量代谢、氮代谢和体内氧化还原过程。因此，钼也被广泛应用于医、保健品等领域。
在地球的壳幔中，钼的含量很。但由于其分布不均匀，钼矿资源的开发利用仍存在一定的挑战。目前，主要的钼矿产国包括中国、美国、智利、土耳其、俄罗斯等。为了地开发和利用钼资源，提高钼的回收率和利用效率，各国积投入研究和开发工作，以满足不断增长的工业需求。
《钼及各种钼制品的用途.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《钼及各种钼制品的用途.doc（14页珍藏版）》请在咨信网上搜索。
钼及各种钼制品的用途
钼（mu）钼（Molybdenum）是一种化学元素，它的化学符号是Mo，它的原子序数是42，是一种灰的过渡金属。钼的纯金属是银白，坚硬。把少量钼加到钢之中，可使钢变硬。钼是对植物很重要的营养素，也在一些酶之中找得到。钼-99是钼的放射性同位素之一，他在医院里用于制备锝-99。锝-99是一种放射性同位素，病人服用后可用于内脏器官造影。用于该种用途的钼-99通常用氧化铝粉吸收后存储在相对较小的容器中。当钼-99衰变时生成锝-99，在需要时可把锝-99从容器中取出发给病人。
钼的密度10.2克/立方厘米。熔点2610℃。沸点5560℃。化合价+2、+4和+6，稳定价为+6。钼是一种过渡钼精粉元素，易改变其氧化状态，在体内的氧化还原反应中起着传递电子的作用。在氧化的形式下，钼很可能是处于+6价状态。虽然在电子转移期间它也很可能首先还原为+5价状态，但是在还原后的酶中也曾发现过钼的其他氧化状态。钼是黄嘌呤氧化酶/脱氢酶、醛氧化酶和亚硫酸盐氧化酶的组成成分，从而确知其为人体及动植物的微量元素。
钼是一种金属元素，通常用作合金及不锈钢的添加剂。它可增强合金的强度、硬度、可焊性及韧性，还可增强其耐高温强度及耐腐蚀性能。
钼在地球上的蕴藏量较少，其含量仅占地壳重量的0.001%，钼矿总储量约为1500万吨，主要分布在美国、中国、智利、俄罗斯、加拿大等国。我国已探明的钼金属储量为172万吨，基础储量为343万吨，仅次于美国而居世界第二位。钼矿集中分布在陕西、河南、吉林和辽宁等四省。世界上金属储量在50万吨以上的特大型钼矿共有六个，我国的河南栾川、吉林大黑山和陕西金堆城三大钼矿榜上有名。
的钼资源，为我国发展钼的冶炼和加工，大力推广钼的应用，提供了为有利的条件和坚实的基础。
钼与钨一样是一种难熔稀有金属。钼的熔点为2620℃，由于原子间结合力强，所以在常温和高温下强度都很高。它的膨胀系数小，导电率大，导热性能好。在常温下不与盐酸、氢氟酸及碱溶液反应，仅溶于硝酸、王水或浓硫酸之中，对大多数液态金属、非金属熔渣和熔融玻璃亦相当稳定。因此，钼及其合金在冶金、农业、电气、化工、和宇航等重要部门有着广泛的应用和良好的前景，成为国民经济中一种重要的原料和不可替代的战略物质。
二、钼在我国的开采使用状况
近年来，我国钼的开采、冶炼和加工得到了迅速的发展。据资料介绍，2001年我国实际生产钼精矿72000吨，氧化钼33000吨，钼铁7600吨，各类钼酸铵9500吨，钼条1183吨，钼板坯1200吨，钼板材150吨，钼圆片40余吨，钼顶头及其他异型制品约50吨，电光源行业及机械加工钼丝31.5亿米，还有润滑剂、催化剂、颜料等化工产品数百吨。不仅如此，我国在世界钼市场中占有举足轻重的，据海关统计，2001年我国出口钼矿焙砂、钼酸盐、钼铁及其他钼制品70274吨之多，创汇达2.62亿美元。
钼的消费形式以工业三氧化钼为主，约占70%，钼铁约占20%，金属钼和钼化学制品各占5%。其应用领域和分配比例大概如下:钢铁冶炼消费约占80%（其中合金钢约为43%，不锈钢约为23%，工具钢和高速钢约8%，铸铁和轧辊约为6%），化工产品约占10%，金属钼制品消费约占6%，高温高强度合金和合金约占3%，其他钼制品约为1%。由上可见钢铁工业的发展对钼的消费起着决定性的作用，但随着科学技术的发展，钼在高科技和其他领域的应用将会不断地扩大和发展。根据世界各国钼消费统计，钼在钢铁工业中的应用仍然占据着主要的位置。钼作为钢的合金化元素，可以提高钢的强度，是高温强度和韧性；提高钢在酸碱溶液和液态金属中的抗蚀性；提高钢的耐磨性和改善淬透性、焊接性和耐热性。钼是一种良好的形成碳化物的元素，在炼钢的过程中不氧化，可单独使用也可与其他合金元素共同使用。钢的耗钼量在有规律地增长，目前每吨钢的钼消耗量已达到0.201公斤的水平。
钼与铬、镍、锰和硅等可制造不同类型的不锈钢、工具钢、高速钢和合金钢等。所制成的不锈钢有良好的耐腐蚀性能，可用于石油开采的耐腐蚀钢管，一种加钼约6%的不锈钢还可取代钛用于海水淡化装置、远洋船舶、海上石油及天然气开采管道。这类不锈钢还可以用于汽车外壳、污水处理设备等。含钼工具钢的效率是钨工具的两倍，性能优良，成本低廉且重量较轻。钼系列高速钢具有碳化物不均匀性、耐磨、韧性好、高温塑性强等优点，适用于制造成型刀具。含钼合金钢可用于制造机床结构部件，工业车辆和推土设备。在轧制状态下有微细珠光体组织的含钼合金钢，是铁轨和桥梁建设中的重要钢材。
钼作为铁的合金添加剂，有助于形成珠光体的基体，能改善铸铁的强度和韧性，提高大型铸件组织的均匀性，还可以提高热处理铸件的可淬性。含钼灰口铸铁具有很好的耐磨性，可作重型车辆的闸轮和刹车片等。
电子电气
钼有良好的导电和高温性能，是与玻璃的热膨胀系数其相近，广泛地用于制造灯泡中螺旋灯丝的芯线、引出线、挂钩、支架、边杆及其他部件，在电子管中做栅和阳支撑材料。在超大型集成电路中钼用作金属氧化物半导体栅，把集成电路安装在钼上可以消除“双金属效应”。超薄型无缝钼管（约15μm）可用作高清晰度电视机显象管的阳支架，这种电视机的图象扫描线达1125条，比一般的电视机提高2倍。钼圆片还可作功率晶体管隔热屏和硅整流器的基板和散热片。
在现代电子工业中除使用纯钼外，Mo-Re合金可作电子管和特种灯泡的结构材料，Mo-50Re和TZM合金还可作高功率微波管和毫米波管中的热离子阴结构元件，其工作温度可达到1200℃，电流密度可达10安培/厘米2。作为引出线的的纯钼丝再结晶温度低，在高温下易出现脆化，影响使用寿命，近年来，有人研制出添加Si、k和C等元素，以提高再结晶温度，生产出“高温钼丝”。采取在氧化钼生产过程中添加稀土元素钇、铈、镧等，更能有效地提高再结晶温度，克服材料高温脆化问题。含0.1—0.3%锆、0.1%钪的钼丝，在1200℃氮化处理，使钪弥散到整个合金中去，这种钼丝在20℃时抗拉强度可达到1400百万帕斯卡。
模具工业的迅速发展，使电火花加工技术得到普遍的应用，钼丝是理想的电火花线切割机床用电丝，可切割各种钢材和硬质合金，加工形状其复杂的零件，其放电加工稳定，能有效地提高模具的精度。
以上是钼丝两种为广泛的用途，灯泡制造业的发展和模具制造业的崛起，使得钼丝的生产和消费突飞猛进。据中国照明协会统计，2001年全国生产钼丝达到31.5亿米，实际产量估计达到40亿米，消耗将近800吨钼条，其数量十分可观。其中线切割用钼丝产量超过20亿米，占钼丝总量的一半以上，其市场发展前景十分令人乐观。
钨-铜假合金广泛应用电火花切削工具电，然而近年来研究以钼取代钨作电，结果表明，钨基和钼基电随铜（≤50%重量）的含量而变的耐蚀性是不一样的。在加热脉冲和机械负荷脉冲存在时，这种耐腐蚀性主要取决于脆裂过程，钼的延-脆性转变温度较钨低，所以脆性小，耐蚀性能较强。钼-铜、钼-银假合金具有耐烧蚀性和良好的导电性，可以作为空气开关、高压开关和接触器的触点。钼-铜复合薄膜在连续的铜机体上夹带大量的离散钼粒子，显微组织均匀，有良好的穿厚导热性和导电性，可作金属芯子应用于多层电路板中。
近，还研制出可变的三氧化钼，这种材料在强光照射下会改变颜，且可轻易还原，可用于电子计算机光存储元件及多次使用的复印材料。
农用肥料
钼是植物体内的“微量元素”之一，约占植物干物量的0.5ppm左右，是不可缺少和不可替代的。近年来国内外广泛地采用钼酸铵作为微量元素肥料，能显著地提高豆类植物、牧草及其他作物的质量和产量。这主要是钼能促进根瘤菌和其他固氮生物对空气中氮的固定，并将氮元素进一步转化成植物所需的蛋白质。钼也能促进植物对磷的吸收和在植物体内发挥其作用。钼还能加快植物体内醣类的形成与转化，提高植物叶绿素的含量与稳定性，提高维生素丙的含量。不仅如此，钼还能提高植物的抗旱抗寒能力以及抗病性。
施用钼肥的特点是用量少，收效大，成本低，是提高农业收成是使大豆丰收的一项重要措施。钼在农业上的广泛应用，也为我国钼生产工厂的废水、废渣及低品位矿的综合利用，开辟了一条新的途径。
汽车喷涂
钼的熔点高达2620℃，且有良好的高温性能和耐腐蚀性能，钼与钢铁结合力强，因而是汽车部件生产中主要的热喷涂材料。汽车部件一般采用钼丝高速火焰喷涂，喷枪的气体混合喷射装置产生高温燃气燃烧，设计的燃烧室和气体喷射混合室，使钼丝在熔化前，以高的速度喷涂在工件的表面上，喷射钼的致密度可达99%以上，结合强度接近10公斤/㎜2。这一工艺过程能有效地改善受磨面的耐磨性，也提供了一个可以浸渍润滑油的多孔表面。它广泛地应用于汽车工业以提高活塞环、同步环、拨叉和其他受磨部件的性能，也用于修复磨损的曲轴、轧辊、轴杆和其他机械部件。据资料介绍喷涂钼丝欧洲市场年销售量可达1000吨，美国每年消耗量也达600吨左右，日本每年也消耗钼丝30—40吨，我国喷涂钼丝市场容量尚小于每年30吨。但随着我国汽车工业的发展，汽车齿轮和其它部件的热喷涂将有较大发展，喷涂钼丝的销售量将大幅度增长。
高温元件
钼的纯度高、耐高温、蒸汽压低等特性，使之常常被用来制造高温炉的发热体和结构材料。在钨钼及硬质合金生产过程中，大都采用钼丝加热的方式制作还原炉和烧结炉，部份铁制品连续烧结还采用钼杆加热排作发热体，钼杆加热排以钼钩悬挂于炉子的两侧。这类炉子一般为还原性气氛或非氧化性气氛，在氢气和分解氨中钼丝可使用至接近熔点，氮气中可使用至2000℃。高于1700℃使用时，可采用再结晶温度更高、强度的TZM合金或钼镧合金作发热体。钼在熔化的石英中有很好的抗烧蚀性能，在玻璃工业中用作通电熔融电，每生产一吨玻璃钼电仅损失7.8克，使用寿命可长达一年多。除作电外，钼还用作玻璃熔化高温结构材料，如导槽、管子、坩埚、流口以及稀土冶炼的搅拌棒。以钼代铂在玻璃纤维拉丝炉上使用效果良好，大大降低了生产成本。新近研制出的核燃料烧结炉采用钼网加热，用ф0.8mm钼丝编织成三相网状加热器，工作温度可达1800—2000℃。除此之外，钼及其合金还可以作热等静压的炉架、隔热屏、烧结和蒸涂的料舟、SmCo磁体及二氧化铀烧结的垫板，热电偶及其保护套管等。
硅化钼（MoSi2）是一种应用为普遍的电热元件材料，具有抗高温氧化、的耐蚀性能和高熔点等特性。其抗氧化性是由于在加热表面形成了不透气的玻璃薄膜，使之不受氧、氮、一氧化碳和二氧化硫的破坏，在1700—2000ºK温度下，二硅化钼加热可以工作二、三年之久。但低劣的机械性能影响硅化钼的应用，如果在硅化钼中加入SiC形成一种复合材料，这种材料将碳化硅弥散进二硅化钼的基体中，生成含有钼原子和硅原子的双金属化合物，其高温强度较二硅化钼单体高8倍之多，使其应用前景大受青睐。
石油开采
在开发低洼地区酸性天然气、油田和开发海底油气田时，不大量的H2S气体产生，还有海水的浸蚀，使钻探管道硫化发脆，迅速腐蚀。选用含钼高强度不锈钢管可有效地抵抗H2S气体和海水的腐蚀，大大节约钢材，降低油气井的钻探成本。
钼不仅可以应用于油气田钻探管道方面，还常常与钻、镍相结合作石油提炼预处理的催化剂，主要是石油，石油化学产品及液化煤的脱硫。在氢处理过程中，硫化物在催化剂的表面与氢反应，硫离子以硫化氢的形式除掉，同时消除了原油中氮和金属杂质，以减少这些杂质在石油精炼时对其他催化剂的毒化，从而改善产品的泽、气味和提高其稳定性。钼催化剂钝化后在其表面残留一层碳，如果烧掉碳层，催化剂又可恢复其活性状态，使用寿命可为1—5年左右。钼在石油裂化与重整中起着重要的作用，是一种理想的电子供体和载体。
环境保护
人们越来越清楚地认识到，钼在控制环境污染方面起着重要的作用，含钼不锈钢的大量应用，大大减少了因锈蚀而造成对环境的影响；另外钼及其化合物大都没有毒性，利用比较的钼取代有毒的金属，也是钼对人类环境保护的一大贡献。在油漆和颜料工业中钼可取代有毒的铬、铅、钛等金属，并且是的着剂；在化学制品行业可取代防腐剂中的铬和阻燃物，硝烟物中的锑；钼在水处理工业中的应用中也具有潜力，主要在开路和闭路循环冷却系统的冷却水处理中用于抑制腐蚀，在开路冷却塔中每升冷却剂的二钼酸钠含量为10毫克，而闭路冷却水空调装置中每升可达150毫克，钼酸钠作为汽车防冻剂和冷却系统以及切削液中防腐剂的用量也在不断增加。有人还提出钼可以改善玻璃化土壤，简化高污染土壤的处理，减少土壤污染。
航空及核工业
钼合金由于有好的耐热性能和高温机械性能，可作航空器发动机的火焰导向器和燃烧室，宇航器液体火箭发动机的喉管、喷嘴和阀门，重返飞行器的端头，卫星和飞船的蒙皮、船翼及导向片和保护涂层材料，钼热胀系数低和导热性能好，在太阳辐射光强烈作用下尺寸稳定性好，用金属钼网作造卫星天线，可以保持其抛物的外型，而较之石墨复合天线重量更轻。巡航式导弹使用钼涂层材料作汽轮转子，在1300℃高温下工作，每分钟转速高达4—6万转，已显示出良好的效果。
钼的中子吸收截面小，有较好的强度，对核燃料有较好的稳定性，抗液体金属腐蚀性好，在核聚变反应堆中作转换器铠装元件的保护片。Mo-Re合金可用于空间核反应堆的热离子能量转换器包套材料、加热器、反射器和其他的丝或薄板元件。
钼合金及其他 钼是一种多能的合金化元素，不仅在钢中添加显示出的作用，也能与多种有金属生成性能优良的合金。
在钼中添加Ti、Zr、C的氧化物或碳化物，形成弥散强化合金TZM。TZM合金除应用在宇航和核工业外，还可以作X射线旋转阳零件，压铸模具和挤压模具，在挤压铜基合金时，其操作温度可在870—1200℃。TZM合金还适合作不锈钢热穿孔顶头，穿孔钢管内壁质量好，使用寿命长。加入少量稀土元素的TEM合金有较高的再结晶温度，再结晶时的延性较普通钼材高5倍，也有良好的应用前景。
含钛、锆和碳的钼合金（MT-104），含铪和碳的钼合金（HCM）及含钨、铪和碳的钼合金（HMW）均有较高的强度，可加工成棒、板、锻坯和其他制品，大有用武之地。Mo-30w是一种固溶体合金，熔点达到2800℃以上，在锌冶炼中作熔融金属泵阀和轴、核燃料提纯和电镀等设备管路、搅拌轴、叶轮泵。在钨高比重合金（90W-7Ni-3Fe）中加入一定量的钼，其强度和硬度都随钼含量而增高，其延性则不断降低，能大大地改善作为穿甲弹材料的性能。
碳化钼（Mo2C）和碳化钨混合，加入适当的镧粉，烧结成硬质材料，经粗碎后加入一定量的镍，采用通常的硬质合金生产的方法，可得到粘结相分布良好、致密和细化的碳化钼基硬质合金。金属粘结相采用Co或Ni，也可生成复杂钼—钨碳化物基硬质合金。碳化钼也可添加到金属陶瓷中，以改善其性能。
钼化工产品
钼与铬、铝的盐类可以共同沉积而生成钼铬红颜料，钼酸根离子与金属表面的铁离子形成难溶的Fe2(MoO4)3，从而使金属表面钝化，达到防锈的效果。其颜变化由淡澄到淡红，有着较强的覆盖能力，且颜鲜艳，主要用于涂料、塑料、橡胶、油墨、汽车和船舶涂料等领域。锌、钙和钠的钼酸盐用作抗腐蚀颜料，因其不含影响环境和人类健康的铅而受到普遍的关注。
二硫化钼（MoS2）是一种良好的固体润滑剂，在工业应用中起着十分重要的作用。它具有低的摩擦系数（0.03—0.06），高的屈服强度（3.45MPa），能在高温(350℃)和各种温条件下使用，在真空条件下甚至可以在1200℃正常工作，在高速运转的机械部件中有着十分优良的润滑作用。因而在汽轮机、燃汽轮机、金属轧辊、齿轮齿、模具、汽车及宇航器械上广泛使用。
经过几十年的艰辛努力，我国钼开采，冶炼和加工技术有了长足的进步，钼的应用和推广也取得了可喜的成绩，但与世界水平相比我们仍然感到不足。我们应该充分利用我国钼资源优势，从开采、冶炼到加工建立合理的生产布，大力开展钼制品的深加工。建立一支技术素养较高的生产和科研队伍，大力推广新装备、新技术的应用，加强钼的科研和新产品开发，要加强钼的应用研究，扩大市场容量，要集中科研院所和生产企业的技术力量，成立专门机构，迅速地把科研成果转变成生产力，指导市场消费，扩大外贸出口，使我国成为一个名符其实的钼生产大国，消费大国和出口大国
合金钢、不锈钢、工具钢及铸铁是钼的主要应用领域，其生产量决定着钼的需求，钼在上述钢铁中的作用如下:
< 降低冷却速率至适当值获得一种硬马氏体组织，因而提高了大截面构件的强度、硬度和韧性；
< 降低回火脆性；
< 抗氢脆；
< 抗硫化物引起的应力开裂；
< 提高高温强度；
< 改善不锈钢的防腐性，是防氯化物点蚀；
< 改善高强度低合金钢的焊接性能。
有合金
在大多数超合金及许多镍基、钛基合金中，钼是一种重要的添加元素。在高温下钼能有效加速固体强化，氯化物点蚀，提高在还原液中的防腐性能。
钼基合金
钼及钼合金的用途十分广泛，这是因为它有许多特性，如强度高（2000℃），热膨胀系数低，优良的导热与导电性能，对熔融玻璃、熔盐及熔融金属有较高的防腐性，还可提高薄涂料的耐磨性。
钼 钢
钼是一种钢合金元素，钼不仅将其许多优良性能带入了钢中，而且也很容易地添加到熔融金属中。往钢中添加氧化钼、钼铁或含钼废钢，能大大减小熔炼损耗。
1997年按用途分类的钼的消耗量（总钼含量:115000吨）
渗碳钢
钼(0.15%～0.30%)被用于渗碳钢中，可提高心部低碳部分的可硬化性，同时可增加高碳部分的韧性。对于大截面的零件，如齿轮等，尤其有效。在渗碳过程中钼不被氧化，作为有效的硬化剂，钼不会导致表面产生裂纹和剥落。
用Hastelloy CW6M 铸造的含钼达到20%的可耐高温严重腐蚀的阀门
高温钢
相对于其它合金元素，钼原子很大。所以，它是有效的强化剂，可提高钢的蠕变强度到能够在600℃左右使用的程度。它的尺寸有效地阻止了砷原子向晶界的迁移，从而了回火脆性。氢扩散也被阻止并使氢致开裂的程度减低到小。
应用了钼的这些特性的早的一种高温钢是0.50% C- Mo钢。它已被含钼0.50%～2.0%的Cr-Mo系列钢取代。2.25Cr-1.0%Mo钢是一种主力合金钢，广泛用于石油精炼厂、发电厂和石化厂的设备中。
高强度低合金（HSLA）钢
钼对低碳微合金HSLA钢的发展起了重要的作用。添加0.1%～0.3%的钼可细化针状铁素体晶粒组织,并可增强从其它合金元素获得的沉淀硬化效果。
不必进行强化热处理，HSLA钢就能获得450～600 MPa（65～85 ksi）的高屈服强度。由于塑脆性转变温度低至－60 ℃，这些材料被大量用于修建通向遥远的北油气田的管道。较薄尺寸的含钼HSLA钢具有良好的可成形性，它们的高强度/重量比使其成为理想的汽车构件材料。
石油工业管材
对石油新来源的不断探索已使深油层的开发和发展成为必要，而深油层经常受到腐蚀性的二硫化氢、二氧化碳和高氯化盐水的污染，因而含钼0.15%～0.25%的AISI 4100系列Cr-Mo钢被广泛应用。经改进的含钼0.4%～0.6%的4140系列是对硫化物应力蚀裂（SCC）具抵抗力的低合金钢，可用于含硫井。随着钻井深度的加深及使用条件的不断恶化，含钼更高的不锈钢和镍基合金，如合金C -22（13% Mo）和合金C -276（16% Mo）的应用将不断增加。
不锈钢
由于铬可在钢表面自然形成薄的具有保护作用的钝化膜，所以不锈钢具有耐蚀性。钼可使此钝化膜更强固，并可在钝化膜被氯化物破坏时使其迅速再生。钼含量的增加可提高不锈钢上麻点及裂缝的抗蚀性。
316型（2%～3% Mo）是广泛应用的含钼不锈钢。它被指定用作食品处理和加工及医品生产使用的罐、管道和热交换器材料。增加钼含量可增强对空气中的氯化物的抵抗作用，所以316型可用作海上及海岸周围建筑的选择材料。316型被用于包覆伦敦Canary Wharf 建筑物和世界上高的建筑物-位于马来西亚吉隆坡的Petronas 塔的外层。
双相不锈钢（3%～4% Mo）强度高并对氯化物应力腐蚀开裂具有优良的抗性。初在石油天然气工业中用作输送管的多用途不锈钢现在被更多地应用于化学加工和石油化学工业，并用作纸浆造纸工业的蒸煮器。
具抗蚀性的不锈钢含6%～7.3%Mo。这类合金钢被用作发电厂的冷凝器、海底管道以及核发电厂的关键部件，如工业用水管道。1996年在南韩的一个火力发电厂中，选用含Mo 6%的不锈钢用于装有20多个烟气脱硫洗涤器的吸收塔上。
麻点/隙间腐蚀
钝态氧化铬层在晶界附近和非金属夹杂物附近敏感，可形成微电池并迅速产生麻点。缺氧区域，如垫圈下或搭接处，对类似的腐蚀是很敏感的，而它通常被称作隙间腐蚀。
钼是麻点腐蚀及隙间腐蚀的有效的成本廉的合金元素。暴露在高温下的腐蚀介质中，尤其是含氯化物和硫化物的腐蚀介质中的不锈钢，其中若有外加的或残余的拉应力存在，应力腐蚀开裂（SCC）就会发生。增加钼含量是提高钢抗应力腐蚀开裂的一种有效的方法。
上图示出了在北卡罗来纳大西洋上的LaQue Corrosion Services 的海上大气测试设备上暴露了56年的304型（不含MO）和316型（含3%～4% Mo）测试板。316型未被腐蚀，在恶劣的环境下保持优良状态长达半个多世纪。不含钼的不锈钢被严重腐蚀。此照片形象地反映了不锈钢中添加钼的有益效果。
在其恶劣的操作环境中工作的发电厂的洗涤器、纸浆造纸及化学加工中的设备需要采用含钼量高的合金。含钼高的合金包括典型的含6%～8%Mo的合金和含10%～16% Mo的镍基合金。
工具钢和高速钢
钼的早应用之一是在工具钢及高速钢中用作钨的替代物，很有效且成本低廉。钼的原子量大约是钨的一半，所以1%的钼大致相当于2%的钨。由于这些高合金钢被用于金属零件的加工、切削和成形，所以在较大的温度范围内兼具高硬度、高强度和高韧性。
工具钢
钼可提高工具钢的硬度和耐磨性。通过降低"临界冷却速率"，钼可促进佳马氏体基体的形成，甚至可用于在不扭曲或不开裂的情况下不能迅速冷却的大块复杂铸件上。钼可与铬之类的元素合用形成硬的耐磨碳化物。
由于对工具钢的性能要求不断提高，所以其含钼量也就不断增加。
Mo%
塑性铸造钢
0.5(大)
冷变形钢 0.5～1.0
热变形钢 3.0（大）
高速钢
当工具钢中钼、钨和钒的总含量大于7%且含碳量大于0.6%时，被称为高速钢。此术语是对其能够"高速"切割金属的性能的描述。直到20世纪50年代，含钨18%的T-1还是首选的切削钢，但是可控气氛热处理炉的出现使钼或部分取代钨成为现实，且十分经济有效。
选定的高速钢的典型成分（%）
级别 C Cr Mo W V
T-1 0.75 - - 18.0 1.1
M-2 0.95 4.2 5.0 6.0 2.0
M-7 1.00 3.8 8.7 1.6 2.0
M-42 1.10 3.8 9.5 1.5 1.2
添加5%～10%的钼可有效地使高速钢的硬度和韧性达到佳，并在切割金属时产生的高温下保持这些特性。钼还有一个优点:在高温下，如果铁和铬的初生碳化物在尺寸上迅速长大，那么钢就会变软变脆。
钼，尤其是与钒结合的钼，可将碳化物重组为在高温下较稳定的微小的二次碳化物，从而使钢的软化脆化程度减低到小。
高速钢的大用途是用于制造各种切削工具:钻头、铣刀、齿轮刀具、锯条等。
通过在高速钢表面涂敷薄的但很硬的碳化钛涂层，高速钢有用的切削特性将被进一步提高，该种涂层可减少磨损、提高耐磨性，从而提高切削速度并延长工具寿命。
含钼高速钢的高温磨损性能使其在汽车阀门镶嵌件和凸轮环的新领域的应用很理想。
铸 铁
钼可通过降低珠光体转变温度来提高铸铁的强度和硬度。它还可提高高温下的强度和蠕变阻力。含钼2%～3% 的高铬铸铁比不含钼的高铬铸铁显示出了更大的冲击韧性，且在恶劣的磨蚀条件下应用很理想，比如，在采矿、铣削、破碎等过程中的应用。这些铸铁具有合格的性能，这就不必进行费用高昂的热处理，使其成为其它磨擦材料的价格低廉的替代物。降低奥氏体形成元素比如镍和锰的含量，还能将低温奥氏体的保持力--引起过早损毁的潜在原因减低到小。
硅含量达到4%，钼含量达到1%的高Si-Mo塑性铁的应用越来越引起人们的兴趣。它们能在600℃工作的良好强度使其成为在高温应用中合金含量较高的铁和钢的有效的价格低廉的替代物，如在涡轮增压器外壳、发动机排气歧管和加热炉构件中的应用。经奥氏体淬火的球墨铸铁具有的显微组织，其强度超过了1000 MPa(145 ksi )，且具有良好的冲击韧性。它们的特异性能使其在应用中很理想，如发电、船发动机和大型采矿设备需要的大齿轮和机轴。
粉末冶金
提高高速钢之类的高合金铸锭材料中的合金含量的主要限制是在慢冷却过程中有偏析倾向。粉末冶金技术使钢液雾化为微滴，微滴冷却得其迅速，了内部偏析的发生。通过这些颗粒的凝结产生的钢具有相当均匀的显微组织，与同等的传统品牌的钢相比，它具有无数的优点。许多粉末冶金（PM）高速钢、不锈钢和镍基合金已大量投入市场，而且这种技术预示将来可能生产出高合金钢的新一代产品。
在超耐热合金工业中，粉末冶金（PM）技术能够生产出高合金含量的关键零 件，如燃汽轮机部件。上图 在微电子器件中用于热处理的Mo/Cu和W/Cu散热片
钼基合金
钼金属通常是采用粉末冶金技术生产出来的，钼粉被流体静压力压制成生坯并在约2100 ℃烧结。
在870～1260 ℃的范围内进行热加工。当钼在空气中在约600 ℃以上被加热时形成挥发性的氧化物，所以它的高温应用被限在无氧化或真空环境中。 右下图为含钼量高的蒸汽涡轮机转轴的钢质叶片
钼合金在高温（达到1900 ℃）下具有良好的强度和机械稳定性。它们的高延展性和韧性使其对缺陷和脆性断裂的容限比陶瓷要高。
钼合金的的性能使其具有多种用途:
· 高温发热元件、辐射防护屏、挤压模具、锻造模具等；
· 用于临床诊断的旋转X-射线阳；
· 耐熔融玻璃腐蚀的玻璃熔化炉电和零件；
· 用作半导体芯片防振垫的散热器，其热膨胀系数与硅相匹配；
· 溅射层，只有几埃（10-7 mm）厚，用作集成电路芯片的门及互连；
· 喷射涂层，用于汽车活塞环和机器零件，以减低摩擦改善磨损。
钼与其它金属组成合金可有许多专门用途:
· 钼-钨合金以其对熔融锌的的耐蚀抗性而闻名；
· 包覆铜的钼可用作具有低延伸率、高传导率的电子电路板；
· Mo-25%Re合金用作火箭发动机元件和液体金属热交换器，它们在室温下具有可延展性。
钼粉的球状团聚物
超耐热合金和镍基合金
钼提高了不锈钢的耐蚀性，同样它也能增强镍基合金的抗腐蚀性和机械性能。许多含钼量高、耐蚀性强的镍基合金被广泛地应用在许多领域。
钼在超高温合金中是有效的基体强化剂，超高温合金使喷气发动机成为现实。钼（达到5%）强化了镍基体并通过将镍基与γ初析出相分割开来扩充其工作温度。这些合金被广泛用于旋转构件中，如涡轮机叶片及喷气发动机的涡轮圆盘。高钼合金，如X合金（含钼9%），应用于许多固定的燃烧构件中。现今的超高温合金占喷气发动机重量的三分之一以上。Stellite21，一种含钼5%的钴基熔模铸造合金，对体液具有良好的抗腐蚀性，被广泛地用于制造假肢。
钛基合金
α-β型钛基合金中通常添加不超过5%的钼。这些材料可被有效地热处理至强度超过1000 MPa(145 ksi)，用作航空工业的发动机的空气压缩机及要求低重量、高强度和高耐蚀性的构件中。
化学应用
钼基化学制品具有在+4、+5和+6氧化态之间转变的多种化学性能。由钼酸盐制造的材料包括氧化催化剂，具有感光性和半导电性能。通过对钼化学性质的研究，钼的许多性能为其提供了发展的机会和新的工业性应用。钼化合物通常可用作毒性元素的的替代品。
催化剂
钼基催化剂的应用很广泛。当与钴和镍结合时，钼被用于石油工业，因为它能够将通常存在于原油中的有机硫化合物中的硫去除。由于世界原油供应的进一步扩大及低硫原油的越来越少，钼基催化剂的应用将会增加。钼催化剂在有硫存在的情况下，能够将对废料进行高温分解产生的氢和一氧化碳转换为醇类，否则可致贵金属催化剂中毒。钼还将煤转换为液态。钼不仅可用于经济的燃料精炼，而且在为我们提供一个较的环境方面做了贡献，因为它排硫量较少。
作为选择性氧化催化剂的一个成分，钼可将丙烯、氨水和空气转换为丙烯腈、乙晴和其它化学品，这些材料对塑料和纺织工业很重要。
颜 料
钼酸盐由于具备两种特性而被采用，即稳定的成和耐蚀性能。
钼橙具有光和热稳定性，颜从鲜红-橙到红-黄，被用于颜料和墨水、塑料、橡胶产品、及陶瓷中。磷钼酸，被用来沉淀染料Mithyl Violet（甲紫）和Victoria Blue(维多利亚蓝)。白的缓蚀颜料被用作底漆。
缓蚀剂
钼酸钠由于在较大的Ph值范围内在低碳钢中具有缓蚀作用而取代铬酸盐几十年了。钼酸盐毒性低，而且是对通常添加在缓蚀剂中的有机添加剂有很弱腐蚀性的氧化剂。在空调冷却水和加热系统的构造中，保护低碳钢以防腐蚀是其主要用途。钼酸盐溶液可钢件在加工过程中生锈，并被用在水基液压系统中。还可用作汽车发动机防冻剂的添加剂。
缓蚀颜料，主要是钼酸锌，也有钙和锶的钼酸盐，被用作工业颜料。这些颜料是白的，可用作底漆或其它颜的调配剂。（右图 二硫化钼薄膜横截面的片状结构）
抑烟剂
在电子工程中，导线和电缆的缘层可能对消防人员及在飞机和医院中的人造成烟火危害。八钼酸铵与聚氯乙烯合用会抑制烟尘的形成。随着录像机、电话和计算机网络的不断增加，这些应用也会不断增加和发展。
润滑剂
二硫化钼是常见的钼的自然形态，从矿石中提取净化后直接用作润滑剂。由于二硫化钼为层状结构，因而是一种很有效的润滑剂。这些分层能够在彼此间相互滑动，允许在钢面和其他金属面上流动自如，即使在重压下也是如此，如轴承表面。因为二硫化钼是地热作用形成的，它具有承受热压的化学稳定性。少量的硫与铁反应并形成一个硫化物层，该硫化物层与硫化钼是相容的，保持润滑膜。二硫化钼对许多化学品具有惰性，并在真空下会完成其润滑作用，而石墨则不能。
二硫化钼与其它固体润滑剂相比有许多的性能，包括:
< 二硫化钼不同于石墨，它的摩擦系数低（0.03～0.06），不是吸附膜或气体所致，润滑性是它本身所固有的；
< 与金属的亲和力强；
< 具有膜成型结构；
< 屈服强度高达3450 MPa（500千磅/平方英寸）；
< 在大多数溶剂中具有稳定性；
< 在空气中, 低温350℃下有好的润滑性能（在1200℃惰性或真空条件下）
钼的化合物和水溶性的硫化合物溶液混合后在切削液和金属成型材料中具有润滑性和缓蚀性。油溶性的钼硫化合物，如硫代磷酸盐和硫代氨基甲酸盐，能避免发动机的磨损、氧化和腐蚀。有好几个商业制造厂家都生产这些润滑添加剂。
钼含量 产品类型 用途
1 20 润滑脂:制造、采矿和运输 滚珠和辊子轴承及滚柱轴承、齿槽、底盘及传送器
20 60 糊状物:矿物或合成碱 机器的装配，齿槽、齿轮、万向节、金属成型
0.5 5 工业油和发动机油或合成液 汽车和工业齿轮、减压器、凸轮等
1 20 水性悬浮液 金属加工及工艺、加工润滑剂、螺纹、导轨、包装、压模铸造
达85 胶粘涂料:空气或热愈合的有机或无机涂料 螺纹、工具、开关琐、阀门、导轨、加工润滑剂、金属加工
1 40 金属加工混用化合物、肥皂、粉末等 挤压、冷成型、拉丝、深冲压
10 100 纯粉末或混合粉末 冲裁、冲压、成型、继电器、开关、封装
复合材料
1 10 摩擦产品、烧结的铜制动器 、半金属和非石棉垫 飞机、汽车和火车的刹车衬垫及离合器摩擦片
1 30 塑料、橡胶及金属复合材料 齿轮、导轨、轴承垫圈、0形圈
钼是一种金属元素，通常用作合金及不锈钢的添加剂。它可增强合金的强度、硬度、可焊性及韧性，还可增强其耐高温强度及耐腐蚀性能。
尽管钼主要应用于钢铁领域，但由于钼本身具有多种特性，它在其它合金领域及化工领域的应用也不断扩大。
实验明，钼化合物具有低的毒性，这是钼区别于其它重金属的显著特征之一。
钼资源:
1、储 量
钼从来不以天然元素状态出现，而总是和其它元素结合在一起。虽然发现的钼矿物许许多多，但唯一有工业开采价值的只有辉钼矿（MoS2）-一种钼的天然硫化物。矿床中，辉钼矿的一般品位为0.01%～0.50%，并常常与其它金属（是铜）的硫化物结合在一起。
世界钼资源主要分布在北美及南美的西部山区，美国是世界上大产钼国，也是世界上钼储量大的国家，为5 .4百万吨，几乎占钼总储量的一半。
2、矿 床
钼矿床可分为下面三种类型:
原生钼矿，主要提取辉钼矿精矿；
次生钼矿，从主产品铜中分离钼；
共生钼矿，这类钼矿床中钼和铜的工业开采价值均等。
中国稀有金属网:钼主要用于钢铁工业，其中的大部分是以工业氧化钼压块后直接用于炼钢或铸铁，少部分熔炼成钼铁用于炼钢。低合金钢中的钼含量不大于1%，但这方面的消费却占钼总消费量的50%左右。不锈钢中加入钼，能改善钢的耐腐蚀性。在铸铁中加入钼，能提高铁的强度和耐磨性能。含钼18%的镍基超合金具有熔点高、密度低和热胀系数小等特性，用于制造航空和航天的各种高温部件。金属钼在电子管、晶体管和整流器等电子器件方面得到广泛应用。氧化钼和钼酸盐是化学和石油工业中的优良催化剂。二硫化钼是一种重要的润滑剂，用于航天和机械工业部门。除此之外，二硫化钼因其的抗硫性质，可以在一定条件下催化一氧化碳加氢制取醇类物质，是很有前景的C1化学催化剂。钼是植物所的微量元素之一，在农业上用作微量元素化肥。
丽水多钱回收废钼公司电话
实验室教育
一、实验目的
1.
了解实验室管理制度
2.
主要掌握化学品使用、危险废物处置和应急救援
二、实验室典型隐患及教育案例
1.
试剂瓶放在桌面边缘
2.
做完实验盖子不及时盖好拧紧
3.
废液桶与废弃物存放点无警戒标识
4.
典型事故、事例
8
·
12
天津滨海新区爆炸事故——高校实验室管理的分水岭；
2015
年
8
月
12
日，天津市滨海新区发生火灾爆炸事故造成
165
人遇难 、
8
人失踪，
798
人受伤 ，造成直接经济损失
68.66
亿元。瑞海公司集装箱内的硝化棉在高温等
因素的作用下自燃， 引起相邻集装箱内的硝酸铵等危险化学品发生爆炸。
8
月
14
日紧急《关于深入开展危险化学品和易燃易爆物品专
项整治的紧急通知》
三、一般
1.
应熟悉实验室环境: 水、 电阀门以及通道的位置。 熟悉各类灭火和
应急设备的位置和使用方法。
2.
开展实验时要密切关注实验进展情况， 不得擅自离岗，进行危险实验时至
少
2
人在场。 严禁将实验室内物品私自带出实验室。
3.
实验结束后， 一个离开实验室的人员检查并关闭整个实验室的
水、 电、 气、 门窗。
4.
进入实验室要做好必要的个人防护， 不得在实验室内穿露脚趾的鞋子。
5.
严禁穿着实验室防护服离开实验室， 如就餐或去办公室、休息室和卫生间
等。
6.
禁止在实验室工作区域进食、 饮水、 吸烟、 化妆和处理隐形眼镜。
7.
禁止在实验室储存食品和饮料。
8.
处理性实验材料和动物后， 以及离开实验室前都应洗手。
9.
实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。
四、消防
1.实验室火灾隐患
1)
加热设备引起火灾
2)
违反操作规程引起火灾
不规范的蒸馏、 回流等操作
3)
易燃易爆危险品引起火灾
4)
化学废弃物易引起火灾
5)
用电不规范或电路老化引起火灾
6)
违规吸烟， 乱扔烟头引起火灾
2.
火灾初起的紧急处理
3.
消防器材使用方法
4.
火场自救与逃生常识
生命重要 ！
五、化学品
1.
危险化学品是指具有毒害、腐蚀、爆炸、燃烧、助燃等性质，对人体、环
境具有危害的剧毒化学品和其他化学品。
2.
采购受公安机关管控， 应通过院系申请、 学校等相关部门审批， 由管理
人员登录“危险化学品治安管理信息系统”
进行网上备案，
获得公安机关审批
后， 统一采购。
3.
化学品保存的一般原则:保持整洁、
通风、
隔热、
，
远离热源、
火
源、 电源和水源， 避免阳光直射。
4.
危险品分类存放要求 :如还原剂、 有机物等不能与氧化剂、硫酸、 硝酸
混放；
5.
强酸不能与强氧化剂的盐类混放；
6.
遇酸可产生有害气体的盐类（如: 氰化钾等）不能与酸混放。
六、化学品使用规范
1.
进行实验之前应先阅读使用化学品的技术说明书，了解化学品特性、
影响因素与正确处理事故的方法，采取必要的防护措施。
2.
实验人员穿着适合的实验工作服，长衣长裤，不得穿短裤短裙以及露趾凉鞋。
3.
严格按实验规程进行操作，在能够达到实验目的和效果的前提下，尽量减少
品用量，或者用危险性低的品替代危险性高的品。
4.
不可直接接触品、品尝品味道、把鼻子凑到容器口嗅闻品的气味。
5.
使用剧毒化学品、 爆炸性物品或强挥发性、 刺激性、 恶臭化学品时， 应
在通风良好的条件下进行。
七、危险废物处置
:
1.
破损的玻璃仪器（试管、量筒、烧杯等）应专门存放，不得与实验垃圾混放。
2.
废试剂瓶倒尽残液后应使用纸箱包装存放。
3.
化学实验废液不得直接倒入下水道。液桶盛放不得超过大容量的
80%
。收
集废液后应盖紧盖子（含内盖），存放位置要阴凉并远离热源、 火源。
4.
运送实验废物时，
至少需两人同行，
并穿着实验服，
佩戴口罩和手套，
做
好防护。 配合管理人员检查并称重， 填写入库记录， 粘贴危险废物标签。
八、应急救援:
发生化学事故， 应立即报告老师， 并积采取措施进行应急救援， 然
后送医院治疗。
1.
化学烧灼伤
应立即脱去沾染化学品的衣物，迅速用大量清水长时间冲洗，避免扩大烧伤
面。处理时，应尽可能保持水疱皮的完整性，不要撕去受损的皮肤。
2.
化学
应迅速脱离低温环境和冰冻物体，用
40
℃左右温水将冰冻融化后将衣物脱
下或剪开，然后对部位进行复温，并尽快就医。
3.
吸入化学品中毒
果断措施切断毒源，并打开门、
窗，
降低毒物浓度。迅速将伤员救离现场，
搬至空气新鲜、 流通的地方，松开领口、 紧身衣服和腰带， 以利呼吸畅
通， 使毒物尽快排出。
.
上学期实验:
实验一 蛋白质浓度的测定(1)—— Folin-酚法
一、实验目的
1.
学
Folin-
酚试剂法测定蛋白质含量的原理及方法
2.
学绘制标准曲线
3.
掌握用标准曲线求待测物质含量的方法
二、实验原理
1921 年，Folin 首创，利用蛋白质分子中酪氨酸残基（酚基）还原酚试剂
（磷钨酸
-
磷钼酸）起蓝反应。
1951
年，
Lowry
对此法进行了改进，先在标本
中加碱性铜试剂，再与酚试剂反应，提高了灵敏度。
Folin-酚试剂在碱性条件下不稳定，其磷钼酸盐-磷钨酸盐易被酚类化合
物还原而呈蓝反应(钼蓝和钨蓝的混合物)。由于蛋白质中含有带酚羟基的酪
氨酸(Tyr) ，故有此显反应。该反应分两步进行，首先在碱性溶液中，蛋白质
分子中的肽键与碱性铜试剂中的 Cu2+作用生成紫红的蛋白质- Cu2+复合物，然
后，蛋白质- Cu2+复合物中所含的酪氨酸残基还原酚试剂中的磷钼酸和磷钨酸，
生成蓝的化合物。
在一定浓度范围内，蓝的深浅度与蛋白质浓度呈线性关系，故可根据预先
绘制的标准曲线求出未知样品中蛋白质的含量。
三、实验试剂及仪器
1. 实验试剂
（
1
） 待测样品
（
2
） 酪蛋白标准品
（
3
）
Folin-
酚试剂甲:
（
4
）
Folin-
酚试剂乙:
（
5
）酪蛋白标准溶液母液（
500
μ
g/ml
）:
2. 实验仪器
（
1）722N 型可见分光光度计
（
2）试管 7 支、试管架
（
3）移液枪
（
4）水浴锅
四、实验步骤
1
、标准曲线的绘制:
取六支干净试管编号，按下表加入试剂:（单位毫升）
2.
待测样品:
准确吸取待测样液
0.5ml
于
7
号试管内，加入蒸馏水
0.5ml
、
Folin-
试剂甲
5.0ml
、
Folin-
试剂乙
0.5ml
，重复上步操作，测样品
A500
。
五
、
实验结果与分析
1.
标准曲线绘制
C
X
:为根据待测样品的吸光值查标准曲线所得的蛋白质浓度
编号
(
标准溶液
浓度
)
酪蛋白标准
溶液母液
(500
μ
g/ml)
ml
去离子水
(ml)
Folin-
酚甲
(ml)
Folin-
酚乙
(ml)
A500
1
0.0
1.0
5.0
0.5
0.000
2
0.2
0.8
5.0
0.5
X.XXX
3
0.4
0.6
5.0
0.5
X.XXX
4
0.6
0.4
5.0
0.5
X.XXX
5
0.8
0.2
5.0
0.5
X.XXX
6
1.0
0.0
5.0
0.5
X.XXX
7(?)
待测样液
0.5ml
0.5
5.0
0.5
X.XXX2.
计算待测样品浓度
根据图中数值，计算出待测样品的浓度。
六、实验注意事项
（一）实验操作注意事项
1. Folin-
酚乙试剂在碱性条件下不稳定，当
Folin-
酚试剂加到碱性的铜
-
蛋白质溶
液中后，立即混匀（加一管混匀一管），使还原反应发生在磷钼酸
-
磷钨
酸试剂被破坏之前
;
2.
尽量减少各管之间的反应时间误差；
3.
一定要注意实验的时间，因为溶液的光密度值是随着时间在不断增大的，如
果时间超过了
30
分钟，则测得的光密度值就不准确了；
4.
在使用分光光度计时，拿比皿是要拿它的毛面，不可以用手接触它的光滑
面，自己手上的油污是测量值不准确；
5.
在擦拭比皿时，要顺着一个方向擦；
6.
在比皿中装入的液体量大约要是比皿体积的三分之二
.
（二）标准曲线制作注意事项
1.
作一条标准曲线至少要
5
个点
2.
被测物与标准物应在相同条件下测定
3.
尽量使未经过线上的实验点均匀分布在曲线或直线两侧
4.
标准曲线中标准物浓度有一定的线性范围，应使标准曲线范围在被测物质浓
度的
1/2
～
2
倍之间，并使吸光度在
0.05
～
1.0
范围为宜
（三）移液枪使用注意事项
1.
量程选择:
35%-100%
范围内佳
2.
大体积→小体积
顺时针
;
小体积→大体积 逆时针
3.
将移液枪端垂直插入吸头，左右微微转动，上紧即可
4.
吸液
:
垂直吸液，枪头尖端需浸入液面
2-4mm
以下。慢吸慢放，控制好弹
簧的伸缩速度。吸液速度太快会产生反冲和气泡，导致移液体积不准确。
5.
放液
:
将吸嘴口贴到容器内壁并保持
10-40
°倾斜。平稳地把按钮压到一档，
停约一秒钟后压到二档，排出剩余液体。压住按钮，同时提起移液枪
;
松开
按钮。 按弹射器除去移液嘴。
6.
使用完毕
:
至大量程
,
让弹簧恢复原形，挂至移液枪架上。
七、思考题
1.
试述
Folin-
酚试剂法的优点？
2.
应用本方法有哪些干扰作用？为什么？应如何注意？
3.
什么叫标准曲线？ 绘制标准曲线有何实用意义？
实验二 蛋白质浓度测定(2)-紫外线（UV）吸收法
一、实验目的
1.
学紫外线（
UV
）吸收法测定蛋白质含量的原理
2.
了解紫外分光光度计的构造原理
3.
掌握它的使用方法。
二、实验原理
由于蛋白质分子中酪氨酸和氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此蛋白质具
有吸收紫外线的性质，吸收高峰在
280nm
波长处。在此波长范围内，蛋白质溶
液的光吸收值（
A280
）与其含量呈正比关系，可用作定量测定。
利用紫外线吸收法测定蛋白质含量的优点是迅速、简便、不消耗样品，低浓
度盐类不干扰测定。因此，在蛋白质和酶的生化制备中（是在柱层析分离中）
广泛应用。
此法的缺点是:（
1
）对于测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和氨酸含量差
异较大的蛋白质，有一定的误差；（
2
）若样品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外线的
物质，会出现较大的干扰。 不同的蛋白质和核酸的紫外线吸收是不相同的，即
使经过校正，测定结果也还存在一定的误差。但可作为初步定量的依据。
三、实验试剂及仪器
1. 实验试剂
（
1
）标准蛋白质溶液（
1mg/ml
）
（
2
）待测蛋白质溶液，浓度需稀释至
1mg/ml
附近。
2. 实验仪器
紫外分光光度计、微量移液器、枪头、试管和试管架等
四、实验步骤
1.
标准曲线法:
取
8
支试管，按下表加入试剂（单位
ml
），并进行操作，绘制标准曲线，
A280
值为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标（蛋白质浓度为
mg/ml
）。
2.
取待测蛋白质溶液
2.0 ml
于
5
号试管中
,
加入蒸馏水
2.0 ml
，摇匀，按上述方
法测定
A280
，在标准曲线上查出待测蛋白质浓度。
五
、
实验结果与分析
1
． 原始数据
:
记录各管的
OD
值
2
． 绘制出标准曲线:要求规范作图
（
1
）用铅笔作图、
（
2
）标出横、纵坐标名称及单位
（
3
）标出日期、作者 、曲线名称
（
4
）曲线上体现出待测样品的
OD
值及浓度值。
3.
计算:蛋白质含量。
（
1
）要求: 写出公式、代入数据、写出结果。
(2
）根据标准曲线
R
2
值判断实验结果是否，分析可能造成实验误差
的原因有哪些？
六、实验注意事项
1.
比皿使用时注意不要沾污或将比皿的透光面磨损，应手持比皿的毛
面。
2.
待测液制备好后应尽快测量，避免有物质分解，影响测量结果。
3.
测得的吸光度
A
好控制在
0.2~0.8
之间，超过
1.0
时要做适当稀释。
4.
开关试样室盖时动作要轻缓。
5.
不要在仪器上方倾倒测试样品，以免样品污染仪器表面，损坏仪器。
6.
比皿在盛装样品前，应用所盛装样品冲洗两次，测量结束后比皿应用
蒸馏水清洗干净后倒置晾干。若比皿内有颜挂壁，可用无水乙醇浸泡
清洗。
七、思考题
1.
紫外吸收法与
Folin-
酚比法测定蛋白质含量相比，有何缺点及优点？
2.
若样品中含有核酸类杂质，应如何校正？
3.
分析实验误差产生的原因
4.
为什么吸光度
A
好控制在
0.2~0.8
之间？
实验三 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
一、实验目的
1.
了解电泳的一般原理
2.
掌握醋酸纤维素薄膜电泳操作技术
3.
掌握醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白的方法
二、实验原理
血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于
pH7.4
。它们在
pH8.6
的缓冲
液中均解离带负电荷，在电场中向正移动。
血清中含有清蛋白，
α
-
球蛋白、
β
-
球蛋白、
γ
-
球蛋白和各种脂蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构
象、分子大小、形状及所带的电荷量不同，因而在醋酸纤维素薄膜上电泳的速
度也不同，因此可以将它们分离。
在相同碱性
PH
值缓冲体系中，
分子量小、
等电点低、带负荷电荷多的蛋白质颗粒在电场中迁移速度较快。
醋酸纤维素薄膜电泳是采用醋酸纤维素薄膜作为支持物的一种电泳方法。
醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯，该膜具有均一的泡
沫状结构，厚度约为
120
μ
m
，通透性好，对分子移动阻力少，是一种良好的
电泳支持物。具有微量、、简便、区带清晰、灵敏度高、便于摄影和保存
等优点。常用于科学实验、生化产品分析和临床化验，如血浆蛋白、血红蛋白、
球蛋白、脂蛋白、糖蛋白、甲胎蛋白、同工酶等的分离鉴定。
三、实验试剂及仪器
1.
实验试剂、材料
巴比妥
-
巴比妥钠缓冲溶液，染液，漂洗液，血清
:
医院采血
2.
实验仪器
常压电泳仪、水平电泳槽、点样器、滤纸、醋酸纤维素薄膜、培养皿、镊子等
四、实验步骤
1.
准备和点样 :
将醋酸纤维素薄膜（
2cm
×
8cm
）浸入缓冲溶液中，待浸透用镊子轻轻取出，夹在两层粗滤纸内吸干多余的缓冲液，然后将无光泽面朝上平放于滤纸
上。点样器在血清上蘸一下，再将点样器轻印在加样线上，使血清成一条状点
于醋酸纤维素薄膜一端
1.5
厘米处，将薄膜无光泽面朝下，点样端为阴，进
行电泳。
2.
电泳条件:
电压
80-90V
，恒压，
1h
，电流与薄膜多少相关。
3.
染、漂洗:
电泳完毕，将薄膜浸于染液中
10
分钟，取出，置漂洗液中漂洗
2-3
次至
背景无，再浸于蒸馏水中观察。
五
、
实验结果与分析
以醋酸纤维素薄膜为支持物，正常人血清在
PH8.6
的缓冲体系中电泳
1h
左
右，染后可显示
5
条区带。清蛋白泳动快，其余依次为
α
1-
、
α
2-
、
β
-
及
γ
-
球蛋白，如下图所示。
对照各自电泳结果，分析各将条带是否成功分离，存在的问题及原因有哪些？
六、实验注意事项
1 .
薄膜的浸润与选膜是电泳成败的关键之一。
2.
应将薄膜表面多余的缓冲液用滤纸吸去，吸水量以不干不湿为宜。
3.
分清薄膜的点样面，点样应点在薄膜的毛面上。
4.
点样要细窄、均匀、集中；点样量要适量，不宜过多或过少； 动作要轻、
稳，用力不能太大。
5.
注意薄膜放置的方向。电泳时应将薄膜的点样端置于电泳槽的负端，且
点样面向下。
6.
勿使点样处与电泳槽接触。
7.
应控制染时间。时间长，薄膜底不易脱去；时间太短，着不易区分，
或造成条带染不均匀，必要时可进行复染。
七、思考题
1
．电泳时，点样端置于电场的正还是负？为什么？
2
．电泳后，泳动在前面的是何种蛋白质？各谱带为何种成分？请分析原因。
3 .
电泳图谱清晰的关键是什么？如何正确操作？
实验四 维生素 C 的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法 ）
一、实验目的
1.
学用
2,6
—二氯酚靛酚滴定法测定维生素
C
含量的原理及方法。
2.
掌握滴定法的一般过程及操作技术
二、实验原理
维生素
c
又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料
2,6-
二氯酚靛酚钠盐，本身
则氧化成脱氢抗坏血酸。
2,6-
二氯酚靛酚在碱性溶液中呈深蓝
,
被还原后变为
无，在酸性介质中呈浅红。因此可用蓝的碱性染料
2,6-
二氯酚靛酚标准
溶液滴定样品，对含维生素
C
的酸性浸出液进行氧化还原滴定
,
染料被还原为无
,
当到达滴定终点时
,
多余的染料在酸性介质中则表现为浅红
,
由染料用量计
算样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验试剂及器材
1. 实验试剂:
（
1
）
0.1% 2,6-
二氯酚靛酚
（
2
）
1%
、
2%
草酸溶液
（
3
）标准抗坏血酸溶液（
0.2mgVc/ml
）
（
4
）样液
2. 实验器材:
碱式滴定管、铁架台、蝴蝶夹、锥形瓶、微量移液器、枪头等
四、实验步骤
1.
标准滴定:
取标准
Vc 1.0ml
（含
0.2
毫克抗坏血酸）与空锥形瓶中，加入
9.0ml 1%
草酸，
用
2,6-
二氯酚靛酚滴定至淡红，并保持
15
秒不变即为终点。用所用染料计算
1ml
染料相当于多少毫克抗坏血酸。滴定开始时，染料要迅速加入，直到红不
立即消失，才一滴一滴加入，并不断摇动锥形瓶，直至淡红
15
秒不退。滴定
过程一般不超过
2
分钟。
2.
样液滴定:
取两份样液各
10ml
，分别放入
100ml
锥形瓶中，滴法同前，但不加草酸
计算样品抗坏血酸含量。
五、实验结果与分析
1.
根据标准
V
C
的量及滴定所需的染料，计算出每毫升染料可以滴定到少
V
C
2.
根据待测样液滴定所需的染料体积计算样液中
V
C
的含量
试分析测定的结果与实际是否相符，造成结果误差的原因有哪些？
六、实验注意事项
1.
注意滴定管的正确使用
首先加标准溶液到
0
刻度以上
2-3ml
处，排净尖嘴内的气泡。然后调整液面
高度到
0
刻度或
0
刻度以下。
2.
滴液时先快后慢，接近所取体积时逐点滴入。
3.
读取刻度是目光平视刻度线，刻度线对准液体凹面。
七、思考题
1.
实验过程中，要测得准确的还原型维生素
C
值，实验过程中应注意哪些操作
步骤，为什么？
2.
在测定过程中，样品的草酸提取液为什么不能暴露在光下？
3.
试简述维生素
C
的生理意义。
实验五 从动物组织中提取脱氧核糖核酸
一、实验目的
1.
学和掌握用浓盐法从动物组织中提取
DNA
的原理和技术
2.
了解分离提取
DNA
的一般原理。
二、实验原理
1.
动物细胞中的核糖核酸（
RNA
）与脱氧核糖核酸（
DNA
）与蛋白结合形成核
蛋白。分别表示为
RNP
和
DNP
。
RNP
和
DNP
在不同浓度氯化钠溶液中的溶
解度有显著差别。在
0.14M NaCl
中，
DNP
溶解度低，
RNP
溶解度高；在
1-2M
NaCl
溶液中，
DNP
溶解度高，
RNP
溶解度低。故调整
NaCl
溶液的浓度可将
RNP
和
DNP
从样本中逐步分离出来。
2.
加变性剂
SDS
可使蛋白质变性，与
DNA
分离。 核酸本身带负电荷，结合正
电荷的蛋白质，用于核酸提取的去垢剂，一般都是阴离子去垢剂。去垢剂的作用:
1
）溶解膜蛋白及脂肪，使细胞膜破裂；
2
）溶解核糖体上面的蛋白质，使其解聚，将核酸释放出来；
3
）对
RNase
、
DNase
有一定的抑制作用。如:
SDS
、脱氧胆酸钠、
4-
氨基水杨
酸钠、萘
-1.5-
二磺酸钠、三异丙基萘磺酸钠
3.
用有机溶剂沉淀，去除蛋白。本实验所用的有机溶剂为:氯仿
-
异丙醇混合液
（
24:1
）； 氯仿:使蛋白变性并加速有机相和水相的分层，增加核酸得率，同
时去除脂类。 异丙醇:减少泡沫，也能促使有机相和水相分离。
4. DNA
不溶于乙醇等有机溶剂，因此可用乙醇沉淀法来纯化和浓缩
DNA
。
DNA
分离提取的原则
1
）
DNA
结构的完整
2
）排除其他分子的污染
a.
核酸样品中不应存在对其有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子
b.
将其他生物大分子如蛋白、脂类分子的污染应降到
c.
排除
RNA
的污染
三、实验试剂及器材
1.
试剂:
1
） 新鲜猪肝
2
）
0.14M NaCl-0.15M EDTA Na2
溶液
3
）
25% SDS
4
）
5M NaCl
5
）
氯仿
-
异丙醇混合液
6
）
95%
乙醇
2.
器材:
离心机、恒温水浴箱、托盘天平、烧杯、玻棒、微量移液器等
四、实验步骤
1.
将猪肝用
0.14M Nacl-0.15M EDTANa2
溶液洗去血液，剪碎，置匀浆机中研
磨成糊状。
2.
取
50 mL
猪肝糜离心
6min
，
3500rpm
。（离心机已经调整到位，直接操作即可）
3.
弃去上清液，剩余沉淀用
20mL 0.14M Nacl-0.15M EDTA
溶液洗涤，离心
6min
。
重复以上操作一遍。
目的是尽量除去
RNP
。所得沉淀为
DNP
粗品。
4.
向上述沉淀中加入
0.14M Nacl-0.15M EDTA
溶液，使总体积为
44mL
，然后
滴加
25% SDS
溶液约
3mL
（此步骤由老师把关），边加边搅拌。加毕，于
60℃
水浴保温
10min
，其间不停搅拌，取出冷却至室温。
目的是使核酸与蛋白质分
离。
5.
加入
5M Nacl
溶液
10mL
，此时
Nacl
的浓度正好为
1M
，
DNA
的溶解度是水
中的两倍，搅拌
10min
，加入约一倍体积的氯仿
-
异丙醇（
40ml
）混合液，
充分混匀，离心
6min
，
3500rpm
。
6.
取出离心管，内容物分为三层，上层为
DNA
溶液，中间是变性蛋白质凝胶，
底部为有机相。小心取出上清液，置于烧杯中。
有机相回收！
7.
由老师加入
1.5
倍体积
95%
冷乙醇，边加边轻挑，可观察到
DNA
丝状物缠
绕在玻棒上。
由老师打分。
五、实验注意事项（补充一下）
1.
各操作步骤要轻柔
,
尽量减少
DNA
的人为降解。
2.
取各上清时
,
不应贪多
,
以防非核酸类成分干扰。
3.
异丙醇、乙醇等要预冷
,
以减少
DNA
的降解
,
促进
DNA
与蛋白等的分相及
DNA
沉淀。
4.
提取
DNA
过程中所用到的试剂和器材要进行无核酸酶化处理。
5.
试剂均用高压灭菌双蒸水配制。
实验六 核酸浓度测定——紫外吸收法
一、实验目的
1.
了解
Denovix
的基本原理并掌握其使用方法；
2.
掌握使用紫外分光光度法测定核酸含量的原理和方法。
二、实验原理
核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键，具有紫外吸收。
RNA
和
DNA
的
紫外吸收峰为
260nm
。一般在
260 nm
波长下，每毫升含
1mg DNA
溶液的光吸
收值约为
0.020
，每毫升含
1mgRNA
溶液的光吸收值为
0.022
。故测定待测浓度
RNA
或
DNA
溶液
260nm
的光吸收值即可计算出其中核酸的含量。
蛋白质由于含有芳香氨基酸，因此也能吸收紫外光。通常蛋白质的吸收高峰
在
280nm
处，在
260nm
处的吸收值仅为核酸的十分之一或更低，故核酸样品中
蛋白质含量较低时对核酸的紫外测定影响不大。
纯净的
RNA
溶液，其
A260/A280
≥
2
；纯净的
DNA
溶液，其
A260/A280
≥
1.8
。如果小于
1.8
或
2.0
，表示存在蛋白质或酚类物质的影响。
A230
表示表示样
品中存在一些污染物，如碳水化合物、多肽、苯酚等。
Denovix
核酸蛋白测定仪采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列
分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过待测试的样品后，部分被吸收，
计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
dsDNA
的消光系数为
50
，核酸的浓度
ng/ul=A260
╳
50
RNA
的消光系数为
40
ssDNA
的消光系数为
33
三、实验试剂及器材
（
1）
Denovix
核酸蛋白分析仪（微量）
（
2）微量移液枪、微量枪头、1.5ml 离心管、
ddH2O
、吸水纸、擦镜纸
四、实验步骤
1.
清洗样品台:
2μl
灭菌的
ddH2O
点在样品台上，放下悬臂，
10s
后抬起悬臂，
用干净的无尘纸擦掉即可。
2.
使用溶解样品的缓冲液
1-1.5μl
点在样品台上，放下悬臂，点击
Blank
，测完
之后擦掉即可。
3.
混匀样品后，
1-1.5μl
点在样品台上，放下悬臂，点击
Measure
，出现下图的
界面。
4.
测量完样品后请及时擦掉样品。
五、实验结果
记录核酸的浓度，并分析纯度
六、实验注意事项
1.
首次使用，请先清洁样品台。抬起悬臂，滴
1-2ul
灭菌蒸馏水于样品台上，
放下悬臂使上下界面接触，再用无尘纸或擦镜纸擦去上下表面液滴。
2.
打开测量应用，在样品台上滴加
1ul
溶解样品的
buffer
，注意观察液滴中
不能有气泡。
3.
测量结束后，立即擦掉样品，样品干在样品台上，造成污染。
实验七 血清谷丙转氨酶的测定（King 氏法）
一、实验目的
1.
掌握血清谷丙转氨酶活力测定的原理和方法；
2.
进一步熟练标准曲线的制作和分光光度计的使用。
二、实验原理
1.
生物机体内转氨基作用是
α
-
氨基酸的氨基通过酶促作用转移到
α
－酮酸的
酮基位置上，生产相应的酮酸和氨基酸的化学反应。催化这反应的酶称为转
氨酶，其辅酶为磷酸吡哆醛。转氨酶广泛存在于机体的各种组织中，在肝、
心、肾等组织中的谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性较高。在正常的新陈代谢过
程中，血清内维持一定水平的转氨酶活性（即正常值）。
当肝、心、肾等组织发生病变时，由于组织细胞肿胀，坏死导致大量的酶释
放至血流中，从而引起血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性显著升高。因此测定
这些酶的活性对某些疾病的临场诊断具有重要的参考价值。
2.
血清中的谷
-
丙转氨酶（
ALT
），在
37
℃、
pH7.4
的条件下，可催化基质（底
物）液中的丙氨酸与
α
-
酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸。
3.
生成的丙酮酸可与起终止和显作用的
2,4
二硝基苯肼发生加成反应，生成
丙酮酸
-2,4-
二硝基苯腙，进而在碱性环境中生成红棕的苯腙硝醌化合物，
其颜的深浅在一定范围内与丙酮酸的生成量，亦即与
ALT
活性的高低成正
比关系。据此与同样处理的丙酮酸标准液相比较，便可算出或通过标准曲线
查出血清中
ALT
的活性。
King
氏法谷丙转氨酶活性单位:每毫升血清在
37℃
与
pH7.4
的基质液
作用
60min
，生成
1μmol
丙酮酸为一个单位。临床检验取血清量为
0.1mL
，
报告数据以
100mL
血清计算，因此实际测得结果乘
1000
即可。例如
0.1mL
丙酮酸标准液中丙酮酸含量为
0.2μmol
，即相当
GPT200U/100mL
。
三、实验试剂及器材
1.
试剂:
1
）
pH7.4
磷酸缓冲溶液
2
）
L-
丙氨酸和
α
-
酮戊二酸混合液
3
）丙酮酸标准液
4
）
2
，
4 -
二硝基苯肼溶液
5
）
0.4mol/L NaOH
溶液
2.
器材:
722
分光光度计、微量移液器、枪头、恒温水浴锅、试管、试管架等
四、实验步骤
1.
取
4
支干燥试管，按下表加入试剂:
管号
血 清
（
mL
）
基质液
（
mL
）
标准丙酮酸
（
mL
）
磷酸缓冲液
（
mL
）
1
（空白管）
0.6
2
（对照管）
0.1
0.5
3
（标准管）
0.5
0.1
4
（样品管）
0.1
0.5
2.
加毕摇匀，置
37
℃水浴中保温
30
分钟，取出冷却至室温。各加
0.5mL 2,4 -
二硝基苯肼溶液，准确作用
5
分钟。各加
0.4mol/L NaOH
溶液
5mL
，摇匀，
10
分钟后比。以
1
号管调零，测
2
、
3
、
4
号管
A530
，按下式计算丙酮酸生
成量（注意单位）:
五、实验注意事项
1.
为溶血及其他因素对酶活性测定的影响，实验过程所用的一切器皿（注
射器、试管等）应清洗干净，干燥后方能使用。
2.
为操作结果，测定酶活性时应恒定
pH
，保温时间，选用固定的比
计，比杯以减少误差。
3.
吸量准确，严格控制反应时间和温度。
实验八 基于口腔拭子 PCR 基因组 DNA 扩增实验
一、 实验目的
1.
了解
PCR
基因扩增的一般原理
2.
掌握
PCR
基因扩增操作技术
二、 实验原理
PCR
（
Polymerase Chain Reaction
）是聚合酶链式反应的简称，指在引物指导下由
酶催化的对特定模板
(
克隆或基因组
DNA)
的扩增反应，是模拟体内
DNA
复制
过程，在体外特异性扩增
DNA
片段的一种技术，在分子生物学中有广泛的应
用，包括用于
DNA
作图、
DNA
测序、分子系统遗传学等。
1. PCR
扩增的基本特征及要素如下:
（
1
）
PCR
技术的基本原理类似于
DNA
的天然复制过程
（
2
）是以单链
DNA
为模板，
4
种
dNTP
为底物，在模板
3'
未端有引
物存在的情况下，用酶进行互补链的延伸，多次反复的循环能使微量
的模板
DNA
得到大程度的扩增。
（
3
）
PCR
反应需要在一定的条件下才能完成，只有这些条件协调作
用时才能达到很好的效果
: (1)
缓冲液
; (2)
脱氧三磷酸核苷
(dNTP) ;(3)
引物
;(4)
模板
; (5) DNA
聚合酶。
2.
根据
DNA
的半保留复制，以及
DNA
分子在体外不同的温度下双
链和单链可相互转变的机制，在体外人为地控制反应系统的温度，使
双链
DNA
变性
(denature)
、退火
(annealing)
、延伸
(extension),
实现
DNA
的扩增。
（
1
）变性:模板
DNA
通过加热至
95
℃左右，使
DNA
双螺旋的氢键断裂，
形成单链
DNA,
作为反应的模板；
（
2
）退火:模板
DNA
经加热变性成单链后，温度降至引物的
Tm
值
左右或以下
(
比
Tm
低
5
°
C
，通常为
55~65
°
C)
，引物与模板
DNA
单链的互补序列配对结合；
（
3
）延伸:
DNA
模板
-
引物结合物在
DNA
聚合酶
(
一种耐热的
DNA
聚合酶
)
的作用下，于
70~74
℃下，以引物
3'
端为起始点按
5'
→
3'
方向
使
DNA
新链延伸。
三、试验试剂及器材
1.
仪器:
（
1
）
PCR
仪
（
2
）移液枪、涡旋仪、离心机
2.
样品及试剂:
（
1
）样品:口腔拭子
（
2
）样本稀释液
（
3
）亚甲基四氢叶酸还原酶（
MTHFR
）
C677T
试剂盒
四、实验步骤
1.
口腔拭子样本采集
（
1
）取样前
30
分钟，不要吃东西，吸烟，饮酒等。准备一杯清水，
饮入约
50ml
清水充分洗漱口腔约
10
秒，吐掉；
（
2
）重复上述步骤
2-3
次。取样推荐漱口后半个小时 。
（
3
）撕开口腔拭子外包装，小心取出口腔拭子（注意:整个取样过
程中手不能接触拭子部分）；
（
4
）用拭子刮拭脸颊内部
20-30
次，尽量避免接触牙齿跟舌头；
（
5
）将拭子伸入采样管，根据不同型号的拭子采用推入或折断采样头；
（
6
）旋转采样管，采样完成。
2.
样品的处理
（
1
）取拭子样本涡旋混匀
(30s
左右
)
，再以
1
:
2
吸取拭子样液与样
本稀释液涡旋混匀，反应
2
分钟后，作为模板进行
PCR
实验。
（
2
）
PCR
体系准备:
每人份需做两个反应，取两个
0.2ml PCR
管，在
PCR
管盖上标记
M
、
WT
；在标有
M
的管中加入
44μl M
扩增液，在标有
WT
的管中加入
44μl
WT
扩增液；分别向以上的
M
和
WT
管中个加入
1μl
反应液，盖紧管盖，涡旋混匀，离心待用；在标有
M
和
WT
的管中分别加入
5μl
待测样本
(
已用样本
稀释液处理过
)
，盖紧管盖，涡旋混匀，瞬时离心。
3. PCR
扩增
将
PCR
管放入
PCR
仪中，按如下程序扩增:
50
℃
2 min
；
95
℃
3min30sec
；
94
℃
5sec
、
60
℃
10sec
、
65
℃
30sec
（
31Cycles
）；
65
℃
10min
；
4
℃
Hold
。
取出
PCR
产物，
2~8
℃保存。
五、结果分析
1.
从密封袋中取出检测卡，将待测样本
M
与
WT
管中的
PCR
产物（用
手动或者自动化加样平台）滴加在检测卡对应的样品垫处，待
2~5 min
对结果
进行判读，
20min
后结果不。
2.
将待测样本
M
与
WT
管中的
PCR
产物分别滴加在检测卡对应的样品垫
上，根据在检测线（
T
线）是否出现条带判读
C677T
位点的基因型。若
M
管
产物在试纸条上
T
线处不出现条带而
WT
管产物出现条带，则为野生型
（
677CC
型）；反之则为纯合突变型（
677TT
型），若两管产物均在试纸条
T
线
处出现条带则判读为杂合突变型（
677CT
型）；无效判定:质控线（
C
线）不
出现条带，可能为操作不正确或试纸条已变质损坏。
六、注意事项
实验室应该遵循
PCR
实验规范的要求分区操作，各区物品均为，不得
交叉使用，加模板和引物的移液器不能混用，每次加样后均需更换吸头。
1
．隔离不同操作区
;
2
．分装试剂
;
3
．严格实验操作
;
4
．严格按无菌操作的原则进行
PCR
操作等。
七、思考题
1.
循环次数是否越多越好
?
为何？
2.
如何根据实验结果优化
PCR
体系？
下学期实验:
实验一 核酸浓度测定——定磷法
一、实验目的
1.
掌握定磷法测定核酸含量的原理和方法
2.
熟练掌握分光光度计的使用方法
二、实验原理
1.
核酸分子中含有一定比例的有机磷，一般为
9.2%
左右
(RNA
含磷量约
9.0%
，
DNA
含磷量约为
9.2%)
，若测得某一核酸样品中有机磷的含量，即可推算其
核酸的含量。
2.
用强酸使核酸分子中的有机磷消化成无机磷
3.
酸性环境中，无机磷再与钼酸铵结合成磷钼酸铵。
PO
4 3-
+ 3NH
4 +
+ 12MoO
4 2-
+ 24H
+
(NH
4
)
3
PO
4
·
12MoO
3
·
6H
2
O
↓
(
黄
)+6H
2
O
4.
当有还原剂存在时，
Mo
6+
被还原成
Mo
4+
，此
4
价钼再与试剂中的其它
MoO
4 2
－
结合成
Mo(MoO
4
)
2
或
Mo
3
O
8
呈兰，称为钼兰。
钼兰在一定浓度范围内
(
无
机磷含量在
1
—
25
μ
g),
兰的深浅和磷酸的含量成正比
,
可用比法测定其
光吸收值。
(NH
4
)
3
PO
4
·
12MoO
3
·
6H
2
O +
还原剂（抗坏血酸）
钼兰
Mo(MoO
4
)
2
或
Mo
2
O
8
三、实验试剂及器材
1.
试剂:
1
） 硫酸
2
）标准磷溶液（
20
微克磷
/
毫升）、
3
）定磷试剂（在使用前将上述试剂按以下比例混合
,
蒸馏水
:17% H
2
SO
4
:
2.5%
钼酸铵
: 10%
抗坏血酸
= 2
:
1
:
1
:
1
（
V/V
））
4
）样液
2.
器材:
通风橱、消化仪、容量瓶、移液器、试管、
722
分光光度计等
四、实验步骤
1.
磷标准曲线的绘制:取
6
只试管，按下表加入试剂
管号
标准磷溶液
(mL)
去离子水
(mL)
定磷试剂
(mL)
1
0
3
3
2
0.2
2.8
3
3
0.4
2.6
3
4
0.6
2.4
3
5
0.8
2.2
3
6
1
2
3
7
总磷
3mL
0
3
8
无机磷
3mL
0
3
加毕摇匀，于
45℃
水浴中保温
10
分钟（注意保温时间相同），冷却，测
A660
，
以磷含量为横坐标，
A660
为纵坐标作图。
2.
总磷的测定:
取样液
1.0 mL
于克氏烧瓶中，加入
2.5mL 27% H2SO4 ,
烧瓶口放一小漏斗，
于通风橱中加热消化，浓烟散尽溶液基本无透明即表示消化完成。冷却，将消
化液移至
100mL
容量瓶中，用少量去离子水冲洗烧瓶两次，洗涤液一并倒入容
量瓶，定容，摇匀后取
3.0mL
置于
7
号试管中，加入定磷试剂
3.0mL
，摇匀，
45℃
水浴保温
10
分钟，测
A660
。
3.
无机磷的测定:
取样液
1.0mL
于
100mL
容量瓶中，加去离子水至刻度，摇匀后取
3.0mL
置
于
8
号试管中，加入
3mL
定磷试剂，摇匀，
45℃
水浴保温
10
分钟，测
A660
。
4.
计算:
有机磷
=
总磷
-
无机磷
由标准曲线查得有机磷微克数（
X
）
,
按下式计算样品中核酸百分含量。
样品重量（
2000
微克）
五、实验注意事项
1.
消化溶液定容后务必上下颠倒混匀后再取样。
2. 1-8
号管
同时
加入定磷试剂后再放入
45
度水浴。
3.
分光光度计的使用:不用的时候要开着盖，注意比皿毛面。
顺序为
1-4
；
1 5-7
；
1 8
。个不要动，用于调零。
4.
标准曲线的绘制
:
得到
1-8
号管的吸光度后，写在实验报告表格的右侧。进
里面的电脑，用
excel
拟合曲线，得到
R
方值，写在大家的实验报告纸上。要
求
R
方大于
0.995
，回去写实验报告时需要用坐标纸。
5.
废液盆里
只能
倒
1-8
号管中的溶液。枪头、擦镜纸扔在一次性杯子里。
6.
试剂及器皿清洁，不含磷；研究生检查试管内水珠不挂壁才能走。
实验二 胍盐-
β
巯基乙醇法提取 RNA
一、实验目的
1.掌握胍盐/ß-巯基乙醇法提取 RNA 的原理和方法。
2.掌握链 cDNA 合成的原理和方法。
二、实验原理:
RNA 的提取方法:
1.异硫氰酸胍/苯酚法（TRIZOL）
2.胍盐/ß-巯基乙醇法
胍盐裂解样本，抑制 Rnase 的活性，
β
-巯基乙醇变性蛋白，离心柱上用 DNA
和蛋白酶消化基因组 DNA 和蛋白，然后漂洗纯化的方法。
3.介质吸附法
RNA 的鉴定分析
纯度: OD260/OD280 1.9—2.1 ,说明有部分降解荧光光谱
链 cDNA 的合成:
以 RNA 为模板，反转录为 cDNA，由逆转录酶催化，该酶合成 DNA 时需要引
物引导，常用引物是 oligo dT、随机引物或基因特异引物（GSP）维生素 B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，
对热稳定。维生素 B2 溶液在 430～440 nm 蓝光的照射下，发出绿荧光，荧
光峰在 535 nm。维生素 B2 在 pH=6～7 的溶液中荧光强度大，在 pH=11 的碱
性溶液中荧光消失，所以可以用荧光光度法测维生素 B2 的含量。
三、试剂与仪器:
总 RNA 提取试剂盒（天根 RNAprep Pure Cell/Bacteriit）；链 cDNA
合成试剂盒（Tara PrimeScript™ RT Master Mix）；无菌，无ＲＮＡ酶离心
管无菌，无 RNA 酶枪头低温离心机等
四、实验操作:
1.提取总 RNA
1） 裂解细胞:确定细胞数量，吸除细胞培养基上清，加入 PBS 后吸除，加入
600ul 裂解液 RL（胍盐/ß-巯基乙醇）5min。
2） 将溶液转移至过滤柱 CS 上(过滤柱 CS 放在收集管中)，12,000 rpm 离
心 2 min，收集滤液。
3） 向滤液中加入 1 倍体积 70%乙醇，混匀，得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱
CR3 中， 12,000 rpm 离心 60 sec，倒掉收集管中的废液。
4） 向吸附柱 CR3 中加入 350
μ
l 去蛋白液 RW1，12,000 rpm 离心 60 sec，倒掉
收集管中的废液，将吸附柱 CR3 放回收集管中。
5） 向吸附柱 CR3 加入 80
μ
l 的 DNase I 工作液（10
μ
l DNase I 储存液
+70
μ
l RDD 溶液），室温放置 15 min。
6）向吸附柱 CR3 中加入 350
μ
l 去蛋白液 RW1，12,000 rpm 离心 60 sec，倒掉
收集管中的废液，将吸附柱 CR3 放回收集管中。
7）向吸附柱 CR3 中加入 500
μ
l 漂洗液 RW ，室温静置 2 min，12,000 rpm 离心
60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 CR3 放回收集管中。再重复一次。
8）12,000 rpm 离心 2 min，倒掉废液。将吸附柱 CR3 置于室温放置 10 分钟，以
彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
9）将吸附柱 CR3 转入一个新的 RNase-Free 离心管中，加入 30-100
μ
l
RNase-Free ddH2O 室温放置 2 min，12,000 rpm 离心 2 min，得到 RNA 溶液。
10）RNA 鉴定分析（浓度，纯度）。2. 采用 TaRa PrimeScript RT Master Mix 进行 cDNA 链合成:
1）按下列组分配制 RT 反应液
5X PrimeScrip Mix 2
μ
l
Total RNA (50
μ
M) -- ul
RNase free H2O up to 10
μ
l
2）反转录反应条件如下
37℃ 15min （反转录反应）
85℃ 5sec （反转录酶失活反应）
五、实验注意事项
1. 严格控制外源性 RNA 酶的污染:外源性的 RNA 酶存在于操作人员的手汗、唾
液等，也可存在于灰尘中，造成器械、玻璃制品、塑料制品、电泳槽、研究人
员的手及各种试剂的污染。
2. 大限度地抑制内源性的 RNA 酶:而各种组织和细胞中则含有大量内源性的
RNA 酶。
3. 戴手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致 RNase 污染。
4. 使用无 RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。
5. RNA 在裂解液 RL 中时不会被 RNase 降解。但提取后继续处理过程中应使用不
含 RNase 的塑料和玻璃器皿。
6. 配制溶液应使用无 RNase 的水。
实验三 real-time PCR 测端粒酶 mRNA 表达
一、实验目的
1.掌握 RT-PCR 基因扩增的原理和过程
2.了解端粒酶的结构与功能
二、实验原理:
1. 实时定量 PCR 技术:
利用荧光信号的变化实时检测 PCR 扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，
通过 Ct 值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。
Ct 值的定义:PCR 扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数。
Xn = X0 × （
1＋En）Ct
lg Xt ＝lg X0 ＋ Ct lg（
1＋En）
Ct = -k lg X0 ＋ b
X0 :起始模板数量
En:扩增效率
Xt:荧光扩增信号达到阈值时扩增产物的量，在阈值设定以后，它是一个常数
Log 模板起始浓度与 Ct 值呈线性关系。
模板 DNA 量越多，荧光达到阈值的循环数越少，即 Ct 值越小。
2.常用荧光标记方法:
特异性荧光标记 TaqMan Probe
非特异性荧光标记 SYBR Green I:是一种结合于 dsDNA 双螺旋小沟区域
的具有绿激发波长的染料。
问题点:
SYBR Green I 与双链 DNA 进行结合后散发荧光，因此如果反应体系
中有非特异性扩增或引物二聚体的产生，也将同时被检测，从而可能导致检测
结果不准确。
关键点:
设计合适引物，非特异性扩增！
端粒酶:通过识别并结合富含胞嘧啶 C 的端粒末端，以自身 RNA 为模板， TER
催化，合成端粒的 DNA 重复序列，从而阻止随着 DNA 复制和细胞分裂所
造成的端粒的不断缩短， 进而稳定染体的长度，避免细胞因端粒丢失
所导致的凋亡。因此，端粒酶在细胞永生化和肿瘤发生中起着重要作用。
相对定量分析——2 -
∆ ∆
Ct 法
三、试剂与仪器:
1. LightCycler 480 SYBR Green I Master
2. LightCycler 8-Tube Strips (white)
3. 无菌，无ＲＮＡ酶离心管
4. 无菌，无ＲＮＡ酶枪头
四、实验操作:
1. 加样:试剂 体积
模板（稀释 5 倍） 2µl
Master mix，2×conc. 10µl
正向引物 1µl
反向引物 1µl
水，PCR 级别 6µl
总体积 20µl
2.PCR 程序设定:SYBR Green I 选择“SYBR Green I /HRM Dye”，反应总体积
20 ul。
3.设定每个程序中对应步骤的①温度(Target)、②信号获取模式(Acquisition
Mode)及 ③时间(Hold)。
4.设定完成后，放入样板，窗口右下方的“Start Run” 按钮将由灰变为蓝，
此时即可点击之，开始运行实验。
5.运行完毕后，点击界面左侧“Sample Editor”，对样本详细信息进行编辑。
6.点击界面左边的“Analysis”，进入分析界面，进行 Tm 分析 (Tm Calling) 分
析和相对定量 (Relative Quantification) 分析
五、结果分析
2 - △△Ct 法:假设目的基因和参照基因扩增效率都接近 100%
△Ct（第 n 组）＝16－17＝-1 △Ct（组）＝18－17.4=0.6
△△Ct=△Ct（第 n 组）－△Ct（组）＝-1－0.6＝－1.6
比率（癌细胞组/正常细胞组）=2－△△Ct＝2－（－1.6） = 3
所以 TERT 基因在癌细胞的表达水平是正常细胞的 3 倍。
要求实验报告分析出自己组对比组的结果
六、实验注意事项
1、能标准的使用微量移液器，使重复样本得到相同的结果。2、学会分析溶解曲线，得到循环 CT 值后学会如何分析结果。
实验四 蛋白分子量测定——SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
一、实验目的
1.
学
SDS-PAGE
测定蛋白质分子量的基本原理
2.
掌握
SDS-PAGE
垂直板电泳的操作方法
二、实验原理
聚丙烯酰胺凝胶（
PAGE
）是由丙烯酰胺（
Acr
）和交联试剂
N,N
’
-
甲叉双丙
烯酰胺
(Bis)
在有引发剂（如过硫酸铵）和增速剂（如
N,N,N
’
,N
’
-
四甲基乙二胺，
TEMED
）的情况下聚合而成的。在一定浓度范围内，改变聚合体系中
Acr
和
Bis
的比例，可得到不同网眼大小的凝胶，由于凝胶的三维网状结构，对在凝胶中泳
动的不同分子量的质点有着选择和阻碍，因此具有分子筛效应，决定着聚丙烯酰
胺凝胶的有效分离笵围。
SDS-
聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进了十二烷基硫酸
钠（
sodium dodecyl sulfate
，简称
SDS
），
SDS
是一种阴离子去污剂，它能破坏
蛋白质分子之间以及与其他物质分子之间的非共价键，使蛋白质变性而改变原有
的空间构象。是在强还原剂，如巯基乙醇存在下，由于蛋白质分子内的二硫
键被还原剂打开，不易再氧化，这就了蛋白质分子与
SDS
充分结合，形成
带负电荷的
SDS-
蛋白质复合物。
带负电荷的蛋白质
-SDS
复合物由于结合了大量的
SDS
，使蛋白质丧失了原有的电荷状态，形成了仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除
了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异。
蛋白质
-SDS
复合物在水溶液中的形状，近似于雪茄烟形的长椭圆棒。不同蛋
白质的
SDS
复合物的短轴长度都一样，约为
1.8nm
，而长轴则随蛋白质的分子
量成正比变化。这样的蛋白质
-SDS
复合物在凝胶中的迁移率，受蛋白质原
有电荷和形状的影响，而只是椭圆棒的长度，也就是蛋白质分子量的函数。
lgMw = -bRm + K
Mw
:蛋白质的分子量；
Rm
:相对迁移率
b
: 斜率
;
K
:截距
当条件一定时，
b
，
K
均为常数，即此时
lgMw
与
Rm
的关系为线性关系，
如以
lgMw
对
mR
作图，应得到一条直线，如上图。
若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量的对数作图，可获得一条标
准曲线。未知蛋白质的相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲
线上求得分子量。
三、实验试剂及仪器
1.
实验试剂
（
1
）
30%
丙烯酰胺（
Acr
）:
Acr/
甲叉双丙烯酰胺
(Bis)=29:1
（
2
）
10%SDS
（十二烷基磺酸钠）
（
3
）
10%
过硫酸铵
(AP)
（
4
）
TEMED
（四甲基乙二胺）
（
5
）
2
×上样缓冲液:
10%SDS
（
4ml
）
+
巯基乙醇（
1ml
）
+0.2%
溴酚蓝（
2ml +
甘油
2ml +1M pH6.8Tris-HCl
（
1ml
）
（
6
） 浓缩胶缓冲液（
1M Tris-Cl
缓冲液
pH6.8
）
（
7
） 分离胶缓冲液（
1.5M Tris-Cl
缓冲液
pH8.8
）
（
8
） 电泳缓冲液
: (SDS 20g
，
Tris 60g,
甘氨酸
282.2g, pH8.3
）加蒸馏水使其溶
解后定容至
2L
。
（
9
） 固定液:乙醇
500ml
，冰乙酸
100ml
混匀，
（
10
） 染液:考马斯亮蓝
R250 1.25g
，甲醇
225ml
，冰乙酸
50ml
，蒸馏水定
溶至
1L
。
（
11
） 脱液:冰乙酸
80ml
，乙醇
250ml
，加蒸馏水定容至
1L
。
2.
实验仪器
（
1
）垂直板电泳装置、电泳仪、制胶架
（
2
）移液枪、移液管
（
3
） 烧杯、培养皿
（
4
） 离心机
四、实验步骤
1.
装板
将垂直板型电泳装置内的板状凝胶模子取出，将玻璃片洗净、凉干、嵌入
凹槽中，形成一个“夹心”凝胶腔，
把装好的凝胶腔置于仰放的电上槽。将电泳槽、凝胶模子串成一体的垂
直板型电泳装置，垂直放置在水平台面上，灌注胶液。
2.
分离胶的配制（
12%
）
试剂
体积
H2O
3.35
（
ml
）
凝胶贮备液
2.5
（
ml
）
分离胶缓冲液
(pH8.8)
2.5
（
ml
）
10% SDS
0.1
（
ml
）
TEMED
5
（
ul
）
10%
过硫酸铵
50
（
ul
）
总体积
10
（
ml
）
3.
分离胶的灌注和聚合
用移液管将所配制的分离胶缓冲液沿着凝胶腔的长玻璃板的内面缓缓注
入，留出梳齿的齿高加
1cm
的空间以便灌注浓缩胶，然后加满蒸馏水。待分离胶凝固后，倒出蒸馏水，用滤纸吸干。
4.
浓缩胶的配制（
5%
）
试剂
体积
H2O
2.92
（
ml
）
凝胶贮备液
0.8
（
ml
）
分离胶缓冲液
(pH6.8)
1.25
（
ml
）
10% SDS
0.05
（
ml
）
TEMED
5
（
ul
）
10%
过硫酸铵
25
（
ul
）
总体积
5.05
（
ml
）
5.
浓缩胶的灌注和聚合
用移液管将所配制的浓缩胶缓冲液沿着凝胶腔的长玻璃板的内面缓缓
加入，将梳子插入胶液顶部，放置室温下待其聚合。
6.
样品的准备
在低分子量标准蛋白质和待测样品中分别加入适量还原缓冲液，放入沸水
中加热
3-5min
，取出冷至室温。
7.
加样
加入电缓冲液，小心拔出梳齿，用微量注射器向凝胶梳孔内加样。同时加
入
Marker
。
8.
电泳
上槽接负，下槽接正，打开直流电源，刚开始时，电压控制在不高于
100V
，
电流恒定在
10mA
；样品进入分离胶后，电压控制在不高于
140V
，电流恒定在
20mA
。待指示剂染料（溴酚蓝）迁移至凝胶下沿
1.0cm
处停止电泳。
9.
染和脱
电泳结束后，撬开玻璃板， 小心将胶取出，放入一大培养皿中。
染:加入染液，置于摇床上染
2h
。
脱:染完毕，倒出染液，加入脱液，置于摇床上脱，数小时更换
一次脱液，直至背景清晰，拍照。
10.
相对分子质量的计算
量出分离胶顶端距溴酚蓝间的距离
(cm)
以及各蛋白质样品区带中心与分离
胶顶端的距离
(cm)
，按下式计算相对迁移率
:
蛋白质样品距分离胶顶端迁移距离
(cm)
Rm =
溴酚蓝区带中心距分离胶顶端距离
(cm)
以标准蛋白质分子量的对数对相对迁移率作图，得到标准曲线，根据待测样
品相对迁移率，从标准曲线上计算出其分子量。
五
、
实验结果与分析
1.
根据凝胶结果，依据标准蛋白条带，判断各个蛋白质样品区带大概分子量。
2.
测量样品中各种蛋白质分子的相对迁移率
Rm
值，然后根据标准曲线计算
出各自分子量
3.
对实验操作及结果中不足之处进行分析。
六、实验注意事项
1
．丙烯酰胺和双丙烯酰胺具有很强的神经毒性并容易吸附于皮肤，操作时应免
避沾在脸、手等皮肤上。好戴一次性塑料手套操作。
2
．
10%
过硫酸铵现用现配，
4
℃冰箱贮存不超过
48
小时。
3
．灌制凝胶时，应避免产生汽泡，因为汽泡会影响电泳分离效果。
4.
蛋白加样量要合适。加样量太少，条带不清晰
;
加样量太多则泳道超载，条带
过宽而重叠，甚至覆盖至相邻泳道。
5
．刚灌注分离胶混合溶液后，应在分离胶液面上加
1-2cm
高的水层，以阻隔空
气。胶液面上加水层时要小心，缓缓叠加，以免冲坏凝胶的胶面。
七、思考题
1.
在不连续体系
SDS-PAGE
中，当分离胶加完后，需在其上加一层水，为什么
?
2.
电缓冲液中甘氨酸的作用
?
3.
在不连续体系
SDS-PAGE
中，分离胶与浓缩胶中均含有
TEMED
和
AP
，试述
其作用
?
4.
样品液为何在加样前需在沸水中加热几分钟
?
实验五 糖酵解中间产物的鉴定
一、实验目的
1
．掌握糖酵解中间产物的鉴定方法和原理。
2
．熟悉通过酶的抑制作用调节代谢途径。
3
．了解使中间产物堆积的方法在研究中间代谢中的意义。
二、 实验原理
在细胞质中，一分子葡萄糖通过一系列反应转化为两分子丙酮酸，并伴随着
ATP
生成的一系列反应是有机体获得化学能的原始的途径，也是原核生物和真
核生物糖类物质分解代谢的共同途径。利用碘乙酸对糖酵解过程中的
3-
磷酸甘油
醛脱氢酶特异地且不可逆地抑制作用，使
3-
磷酸甘油醛向前变化而积累。硫
酸肼作为稳定剂，用来保护
3-
磷酸苷油醛使其不自发分解。然后用
2,4-
二硝基苯
肼与
3-
磷酸甘油醛在碱性条件下形成
2,4-
二硝基苯肼
-
丙糖的棕复合物，其棕
程度与
3-
磷酸甘油醛含量成正比。从而明糖的分解代谢过程中，含有
3-
磷
酸甘油醛的中间产物。
三、实验试剂及器材
1.实验材料
新鲜酵母
2. 仪器:
离心管、移液枪；恒温水浴；离心机
3.试剂:
1
）
2,4-
二硝基苯肼
: 0.1 g 2,4-
二硝基苯肼溶于水
100 ml 2 mol/L
盐酸溶液中，储
于棕瓶中备用。
2
）
0.56 mol/L
硫酸肼溶液
:
称取
7.28 g
硫酸肼溶于
50 ml
水中，这时不会溶
解，当加入
NaOH
使
pH
值达
7.4
时则溶解。
3
）
5%
葡萄糖溶液。
4
）
10%
三氯乙酸溶液。
5
）
75 mol/L NaOH
溶液。
6
）
0.002 mol/L
碘乙酸溶液。
四、实验步骤
1．取小烧杯 3 支，编号，分别加入新鲜酵母 0.3 g，并按表 1 分别加入各试剂，
混匀。
2．将各杯混合物分别放入 37℃水浴中保温 1.0 小时，观察发酵管产生气泡的量
有何不同。
3．在 2 号和 3 号杯中按表 2 补加各试剂，摇匀后放 5-10 分钟
4. 将三支离心管中的上清液分别进行离心或者过滤，3000rpm, 3min。
5．取 3 支试管，分别加入上述滤液 0.5 ml，并按表 3 加入试剂和处理。
（取上清液 0.5 ml，加入 0.75 mol/L NaOH 0.5 ml，混匀后在 37℃水浴保温
10 分钟，然后分别向上述试管中加入 0.5 ml 2,4-二硝基苯肼，混匀后在 37℃
水浴保温 10 分钟，然后加入 0.75 mol/L NaOH 3.5 ml，观察实验结果。）
表 1 糖酵解中间产物的鉴定——发酵产生气泡观察
编号
5%
葡萄糖溶
液 （
ml
）
10%
三氯乙
酸（
ml
）
碘乙酸
（
ml
）
硫酸肼
（
ml
）
发泡量
1
10
（
ml
）
2
1
1
2
10
（
ml
）
0
1
1
3
10
（
ml
）
0
0
0
表 2
补加试剂
编号
10%
三氯乙酸
（
ml
）
碘乙酸
（
ml
）
硫酸肼
（
ml
）
发泡量
2
2
0
0
3
2
1
1
表 3 糖酵解中间产物的鉴定——二硝基苯肼反应
五、结果与分析
实验中哪一发酵管生成的气泡多?哪一管生成的颜深? 为什么?
描述观察到得实验现象并对实验结果加以分析。包括保温后的气泡量及的
显效果。
六、注意事项
1. 本实验虽为定性鉴定，但量取体积等人要求相对准确 ；
2. 注意试剂的添加顺序，编号不要弄混 ；
3. 每步反应前注意要充分混匀 。
七、思考与讨论
1. 实验鉴定的是哪种中间产物？
2. 实验中三氯乙酸、碘乙酸、硫酸肼三种试剂分别起什么作用？
3. 实验中的气泡是什么气体? 如何产生的？
编号
滤液
（ml）
0.75 mol/L
NaOH（ml）
摇
匀
，
室
温
放
置
5
分
钟
2，4-二硝基
苯肼 （ml）
摇
匀
，
室
温
放
置
5
分
钟
0.75 mol/L
NaOH（ml）
1
0.5
0.5
0.5
3.5
2
0.5
0.5
0.5
3.5
3
0.5
0.5
0.5
3.5
实验六 荧光分光光度法测定维生素 B2 的含量
一、实验目的
1．学荧光分光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素 B2 的分析原理；
2．掌握荧光分光光度计的使用方法；
3．了解分子荧光产生的机理.
二、 实验原理
维生素 B2 易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光
照易分解，对热稳定。 维生素 B2 在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为
光黄素，光黄素的荧光比核黄素的荧光强的多，故测 VB2 的荧光时溶液要控制在
酸性范围内，且在避光条件下进行。
核黄素
(V
B2
)
光黄素
多维葡萄糖中含有维生素 B1、B2、C、D2 及葡萄糖，其中维生素 C 和葡萄糖
在水溶液中不发荧光，维生素 B1 本身无荧光，在碱性溶液中用铁氰化钾氧化后
才产生荧光，维生素 D2 用二氯乙酸处理后才有荧光，他们都不干扰维生素 B2
的测定。
维生素 B2 溶液在 430～440 nm 蓝光的照射下，发出绿荧光，其峰值波长为
545 nm。VB2 的荧光在 pH=6～7 时强，在 pH=11 时消失。
三、实验试剂及器材
1. 试剂:
100
μ
g/mlVB2 标准溶液（4%冰醋酸配制，置阴暗处保存）；冰乙酸；
多维葡萄糖粉试样
2. 器材:
岛津 RF5301PC 荧光分光光度计 ；微量移液器 ；容量瓶；石英比皿
四、实验步骤
1、打开氙灯，再打开主机，然后打开计算机启动工作站并初始化仪器。
2、仪器初始化完毕后，在工作界面上选择测量项目
设置适当的仪器参数:激发波长 Ex= 435 nm，发射波长 Em=545nm。
3、标准曲线测定，样品测定。
4、制作标准曲线，由标准曲线计算样品中维生素 B2 的含量。
5、 退出主程序，关闭计算机，先关主机，关氙灯。
五、结果与分析
1、 原始数据:标准曲线以及样本的荧光值。
测量 1-6 号标准曲线荧光值:VB2 的含量:0.0ug/ml、0.1ug/ml、0.2ug/ml、
0.3ug/ml、0.4ug/ml、0.5ug/ml。
测量 7 号样品荧光值
2、绘制出标准曲线:要求规范作图
铅笔作图；
横、纵坐标名称及单位；
日期、作者 、曲线名称；
曲线上体现出待测样品的荧光值及浓度值。
3、计算:样品中维生素 B2 的量。
要求: 写出公式、代入数据、写出结果。
实验八 pH 值和温度对酶促反应速度的影响
一、实验目的
1
．了解不同
pH
和温度对淀粉水解和唾液淀粉酶活性的影响。
2
．学会测定酶适
pH
和温度的方法。
二、实验原理
酶都是蛋白质，它的活性受环境 pH 的影响为显著。通常各种酶只有在一
定的 pH 范围内才表现它的活性，一种酶表现其高活性时 pH 的值，称为该酶的适 pH。本实验以唾液淀粉酶在不同的温度和 pH 下对淀粉的作用为例观察温度
和 pH 对酶活性的影响，淀粉的水解程度用其与碘液的呈反应加以区别。
三、实验试剂及器材
1. 试剂:
淀粉；碘；碘化钾；磷酸氢二钠；柠檬酸
2. 器材:
试管 吸量管 试管架 吸耳球
四、实验步骤
1. 溶液配制:
0.5%淀粉溶液（含 0.3%氯化钠）（新鲜配置），碘-碘化钾溶液（4 g 碘及碘化
钾 6 g 溶于 100 ml 蒸馏水中，于棕瓶中保存），0.2 mol/L 磷酸氢二钠溶液，
0.1 mol/L 柠檬酸溶液。
2. 样品收集
每人取一个干净的小烧杯，先用自来水漱口，将口腔内的食物残渣清除干净，
然后去蒸馏水约 20ml 含入口中，做咀嚼动作 3-4min,以分泌较多的唾液。将
口腔中的蒸馏水吐入干净的小烧杯中，此即为稀释的唾液淀粉酶液。
3. pH 对酶活性的影响
（
1）缓冲液的配制
编号
0.2mol/L
磷酸氢二纳（
ml
）
0.1mol/L
柠檬酸（
ml
）
缓冲液（
ml
）
1
5.15
4.85
5.0
2
6.16
3.39
6.2
3
7.72
2.28
6.8
4
9.08
0.92
7.4
5
9.72
0.28
8.0
（
2）底物的准备
6 支干燥的试管编号，依次加入不同 pH 的缓冲液各 3 ml，第 6 号试管与第
3 号相同。再向每个试管中添加 0.5%淀粉溶液 2 ml，摇匀。
（
3）酶促反应时间测定
向第 6 号试管加入稀释 100 倍的唾液 2 ml，摇匀后放入 37 ℃恒温水浴中保
温。每分钟取 1 滴混合液于离心管中或反应板上，加 1 滴碘化钾-碘溶液，呈橙
黄时取出试管，记录时间。
（
4）适 pH 测定
以 1 min 的间隔，依次向 1～5 号试管中加入稀释 200 倍的唾液 2 ml，摇匀，
同样以 1 min 间隔，将 5 只试管放入 37 ℃恒温水浴中保温，反应至所需时间。
依次取出，立即加入碘化钾-碘液 2 滴，充分摇匀。观察颜，可看出不同 pH
值时淀粉被水解的程度，不同 pH 值对唾液淀粉酶活性的影响，并确定其适 pH。
4. 温度对酶活性的影响
(1）取三支试管按下表操作:
试剂
管号
1
2
3
1%
淀粉溶液（
ml
）
1
1
1
放置条件
沸水浴
37
℃
冰浴
稀释唾液（滴）
4
4
4
分别按上述条件继续放置 10 min。
(2) 从三支试管中取出溶液 1 滴于离心管中或反应板上，加上 1 滴碘液，观察呈
现象，记录结果并解释其原因。
五、注意事项
1. 各管反应及操作应在同一水平；
2. 每管间隔相同的时间加样和终止反应以各管反应时间相同。
附件:生化实验.pdf
钼（Mo）是一种金属元素，原子序数为42。它是一种银白的有光泽的金属，具有高熔点和高热导率。钼在自然界中以多种矿石的形式存在，常见的是钼辉矿和钼铜矿。
钼具有许多重要的工业应用。由于其高熔点和耐高温性能，钼被广泛用于制造高温合金、耐火材料和真空炉。钼还是电子产业中重要的材料，用于制造电子管、半导体器件和薄膜电阻器。此外，钼还被用于制造钼丝、钼箔、钼片等材料，用于电子显微镜、X射线管和真空设备。
钼也是一种重要的合金元素。它可以与其他金属如铁、镍、铜等形成合金，提高合金的硬度、强度和耐腐蚀性。钼合金广泛应用于航空航天、汽车、化工等领域。
此外，钼还有一些其他应用。例如，钼在农业中作为植物的微量元素，促进植物生长和提高产量。在医学领域，钼被用作放射性示踪剂和物成分。钼的同位素还被用于放射治疗和核能研究。总体而言，钼在各个领域都有着重要的应用和价值。
化工领域
润滑剂:二氧化钼是一种良好的固体润滑剂，因为它的摩擦系数很低，屈服强度很高，能在真空和各种温、高温下正常使用，因而被广泛应用于燃气轮机、齿轮、模具、航空航天、核工业等领域。
催化剂:钼的化合物是用途广的催化剂之一，被广泛应用到化学、石油、塑料、纺织等行业。例如:二硫化钼具有抗硫性质，可以在一定条件下催化一氧化碳加氢制取醇类物质，是很有前景的C1化学催化剂；钼与钴、镍结合用作石油提炼预处理的催化剂。其他常见的含催化剂有:二硫化钼、氧化钼、钼酸盐、仲钼酸铵等。
电子电气领域
钼具有良好的导电性和耐高温性，热膨胀系数与玻璃相近，被广泛用于制造螺旋灯丝的芯线、引出线及挂钩等部件。此外，钼丝也是理想的电火花线切割机床用电丝，能切割各种钢材和硬质合金，其放电加工稳定，能有效提高模具精度。
医学领域
钼是人体的微量元素之一，也是多种酶的组成部分，在机体的主要功能是参与硫、铁、铜之间的相互反应。适量的钼能够促进人体发育，增强氧在体内的储留下，抑制肿瘤，维护心肌的能量代谢，保护心肌，而钼的缺乏会导致龋齿、肾结石、克山病、大骨节病、食道癌等疾病，因而钼也被用于医中，如钼酸铵这种就主要用于长期依赖静脉高营养的患者。
畜牧领域
钼的生物学作用主要是依靠作为动物体内某些含钼酶类的组成成分，间接影响酶的生物学活性来实现的。除此之外，钼元素在反刍动物营养代谢中发挥着的作用，一方面，钼作为反刍动物瘤胃微生物硝酸盐氧化酶的组成成分，直接参与瘤胃中饲料硝酸盐的转化，另一方面，钼作为硫酸盐氧化酶的辅助因子对瘤胃微生物有刺激作用，这有助于反刍动物对粗纤维类物质的消化，进而促进反刍动物的生长。所以，当牧草和饲料中钼元素含量不足时，就需要按照严格的营养需要和工艺技术要求，将钼元素添加剂加入饲料中，达到满足动物需要的目的，常见的例子就是在奶牛饲料中添加10mg/d的钼。
农业领域
钼为植物体内的“微量元素”之一，缺钼会影响植物正常生长。作为植物生长所的微量元素，钼不仅能促进植物对磷的吸收，还能加速植物体内醇类的形成与转化，提高植物叶绿素和维生素丙的含量，提高植物的抗旱、抗寒以及抗病能力。鉴于钼对植物的重要性，很多国家已经开始生产和使用含钼的微量肥料，例如我国湖南长沙县南华乡用钼酸铵拌种，花生增产32.2％，黑龙江国营农场对大豆施用钼肥，大豆增产10％左右。
据百川盈孚，国内钼价在近两日内迅猛上涨。在继前一日每基吨上调0.75万元之后，4月10日钼铁价格再度攀升，当前报价为每基吨21.4至21.8万元，单日涨幅达0.4万元/基吨，两日内累积上涨近6%。同时，45-50度的钼精矿价格也呈现上升趋势。随着钼市场的迅速回暖，招标价格已经提升至每基吨21.2至21.4万元。
鉴于海外伴生矿的产量下滑以及国内供应增长有限，预计2024年钼产量将大致维持在25万吨左右，相对于需求而言，钼矿的供应可能会显得紧张。近期的逐渐回升，2024年的钼价有望在30至35万元的区间内波动，钼行业的利润空间有望保持稳定。
关注【乐晴行业观察】，洞悉产业格！
钼行业概览
钼位于元素周期表中第42位，隶属于VIB族过渡元素，其位置介于铬和钨（纵向排列）以及铌和锝（横向排列）之间。
有金属钼具有稀有性及稳定化学性质，在工业领域广泛应用。钼在各类中高端合金制造中发挥着重要作用，其成本敏感度相对较低，在钢铁行业中的应用尤为突出，占据约八成的市场需求。
钼的产品形态多样，主要包括钼铁、钼化工产品和钼金属产品三类。
钼铁在钢铁冶炼中作为添加剂，可以有效提升钢材的强度和耐腐蚀性和耐高温性能；钼化工产品如钼酸铵、二硫化钼等则广泛应用于催化剂和润滑剂的制造；钼金属产品如钼粉和钼丝也具有多种工业用途。
我国市场中钼铁是主要的消费形式。钼原矿石经过一系列加工处理，产出含钼量约为60%的钼铁，再经焙烧生成氧化钼，与氧化铁通过热还原反应制成钼铁。
钼金属产品则包括粉末、纯钼和钼基合金；而钼化学品如钼酸盐等，主要应用于石油冶炼的催化剂和润滑剂制造。
钼产业链梳理
钼产业链上游矿山主要负责的开采和钼的生产，中游聚焦于钼矿的冶炼与加工，产出包括钼铁、钼酸铵、钼棒、钼丝等多种产品；下游广泛应用于钢铁、军工、石化等多个重要工业领域。
我国在钼矿的开采和冶炼环节上具有明显的优势，在精深制品加工方面势力强劲。
根据美国地质勘探（USGS）数据，中国的钼储量和产量均位居首位，分别占的31%和42%。美国、秘鲁和智利的储量其次，南美和美国的产量其次。
由于钼矿投资巨大且建设周期长，这将在一定程度上限制行业的产能增长。钼的增量将主要来自国内外的少量铜钼。
此外，下游除以上提及的领域以外，钼金属也正在逐渐拓展到核电、新能源等新兴领域。
钼与钨、铬、钒等金属的合金已被广泛应用于军舰、火箭和卫星等高端装备的制造中。
在风力发电设备的动力部件中，含钼合金钢应用在驱动轴和齿轮部件等方面。
有金属钼产业竞争格和梳理
我国钼矿石行业经历多年的发展，目前形成了相对稳定的市场竞争格。
钼矿石行业属于资本密集型和资源依赖型，同时也深受下游产业驱动，因此具有较高的行业准入门槛，企业间的竞争压力相对较小。
按照年产量，可以将钼矿企分为大中小型。大型企业指的是年产量在3万吨以上的企业，中型企业年产量在1-3万吨之间，而小型企业年产量则在1万吨以下。
目前，规模以上从事钼矿石开采和洗选等相关业务的企业大约有30余家。企业规模的两分化现象较为明显。
国内钼产业链头部企业主要包括金钼股份、洛阳泪业、中国中铁、江西铜业、紫金矿业等。
#钼#
#有金属#
#财经#
#稀缺资源#
2023年中国钼市场竞争格:
料来源:各公司公告、上海券报，国盛券
金钼股份是国内钼矿产能国内，拥有完整的钼产业链布，钼产品包括钼炉料、钼金属和钼化工。金钼股份目前公司控股两座钼矿山，分别是陕西金堆城钼矿和河南汝阳东沟钼矿。公司拥有的钼矿山具有规模大、品位高，故采用露天开采法进行采矿作业。
国内前十大钼矿排名:
数据来源:头研究院，公司公告，西南券
洛阳钼业是领先的钨、钴、铌、钼生产商和重要的铜生产商。公司是前七大钼生产商及大白钨生产商之一，拥有三大，分别是三道庄钼钨矿、上房沟钼矿和新疆哈密东戈壁钼矿。目前在产的三道庄钼属于大的原生钼矿田——栾川钼矿田的一部分，也是大的在产单体钨矿山。