骨髓间充质干细胞原代培养

　　脐带血干细胞及其移植脐带血中含有多种类型的干细胞，主要包括造血干细胞（HSCs)）、间充质干细胞（MSCs）和内皮祖细胞（EPCs)）等。其中，造血干细胞和间充质干细胞在脐带血中含量较多。

　　造血干细胞可分化为所有类型的血细胞；间充质干细胞在一定条件下进行体外培养和诱导可以向神经、成骨、软骨、脂肪、肌腱、肌肉和心肌等细胞方向分化，两者均已广泛应用于临床干细胞移植研究。

　　综合干细胞库是收集、保存、利用干细胞的资源中心，存储多种来源的干细胞资源，如脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、牙髓间充质干细胞、导多能干细胞等。干细胞作为人类遗传资源，存储机构须符合《中华人民共和国生物法》《中华人民共和国人类遗传资源管理条例》等国家相关法律法规要求。在开展保藏干细胞等活动之前，须通过中国人类遗传资源保藏审批，并获得人类遗传资源保藏审批决定批件。用啥存——干细胞存储设备

　　骨髓间充质干细胞原代培养

　　米 用 6 % (质量分数) 轻乙基淀粉(h e s ， 平均相对分子质量 480 000， H e s p a n ， D u p o n ,美国) 沉降后一次离心方法去除大多数红细胞及大部分血浆。具体方法:每份脐带血按体 积 比 1 : 4 的比例加入脐带血内，充 分 混 勻 ，垂 直 倒 置 悬 挂 ，使红细胞自然沉降20〜 3 0 m i n ， 直至红细胞界面下降时，去除红细胞。再将富含有核细胞的血裝在 1〇℃ 4 00g 离 心 l O m i n ， 沉降有核细胞。用血浆积压器去除部分血浆。体 积 为 30——40ml。以上操作均在采集袋中操作 。

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　　程控降温指降温过程采用程序控制，程序结束后将 P B S C 置入液氮中保存。此时的酶活性均被抑制，环境中的射线也不会对细胞造成电离损伤，可较长期保存。该技术仅以二甲亚砜 ( D M S O ) 为冷冻保护液，是经典的造血干细胞保存方法。配 制 冷 冻 保 护 液 : 50% R P M I 1640营养液、 20% D M S O 、 3 0 % 人 A B 血清或自体血浆。

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