干细胞自体移植=做干细胞移植手术有风险吗

　　脐血干细胞的保存 婴儿出生后，留在脐带及胎盘内的血就是脐带血。自古以来，这些血被当成废物丢弃，目前采集脐带血的方式是:婴儿出生后，脐带接扎，剪断，婴儿由助产护士、擦洗、包裹、护理的同时，既可从脐带血(体内采集)，也可待胎盘娩出后再采集(体外采集)。两种方法采集量均可在80ml 左右。

　　脐血采集不会对婴儿和母体造成任何不利影响，只是将原来作为废弃物的脐血收集下来。但应注意的一点是，采集后的脐血应于 24 小时之内进行处理，运送过程中应避免紫外线照射及剧烈震荡，以充分保持细胞的活性。保存者应在产前提前与医院及脐血库联络，以保证脐血的及时、顺利采集。

　　冷冻保护液的添加用 1640培养液将无菌的保护液 (DMS〇 )配 成 20 % 浓 度 ，取与胎肝悬液等体积的2 0 % D M S O , 缓慢加人细胞悬液中，室温静置 10min ，再将样品放入降温仪中。程序降温法:多采用两步或三步降温法，即 开 始 时 从 室 温 以 降 温 ，降至- 3 0 ℃时 ，恒 温 2m i n 后 改 为 5——7℃ /m i n 降至-80℃或- 9 0℃ ， 再转入液氮中 ( - 1 9 6 ℃ ) 长期保存。也有人主张开始降温速度应严格控制在1-3℃ /min，但经过相变(-11—15℃)热释放之后即可加速降温速度，余下各阶段对细胞存活影响不大。

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　　P B S C 与回输:冻存物自液氮中取出后立即放入42℃水浴箱中，融化后立即回输给患者。细胞活力测定:将待测样本分别于冷冻保存前与复苏后Oh、 3 h 、 6 h 采用台盼蓝拒染法检测细胞存活率(吕 秀 荣 2 0 0 4)。这是没有速控条件下的冷冻方法，简单，易重复操作。但是由于这种降温方式在降温的过程中降温速度不恒定，冷冻保护液选择和其对细胞回收率的影响备受重视。Stiff报道了以6 % 羟乙基淀粉 (H E S )、5 % D M S O 及 4 % 人血清白蛋白(A L B )混合物作为冷冻保护液，用非程控降温将骨髓细胞置于- 8 0 ℃冻存的方法。 Halle等(2004)采 用 1 %H A S + 3 . 5 % H E S + 2 . 5 % D M S O 。张俊萍等将D M S O 、 H E S 、 A L B 和 H A S 按不同比例组成冷冻保护液，发 现 5 % D M S O + 6 % H E S +H A S 效果好。范华骅等研制的C P 8 0 低温保护 液 含 7.5% 右旋糖酐、 6.25% D M S O 和 6.25% A L B ，与样品混合后D M S O 浓 度 为 5 % 。

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　　除内源性调控外，干细胞的分化还可受到其周围组织及细胞外基质等外源性因素的影响。   分泌因子   间质细胞能够分泌许多因子，维持干细胞的增殖，分化和存活。有两类因子在不同组织甚至不同种属中  成体干细胞在体内发育为不同组织都发挥重要作用，它们是TGFβ家族和Wnt信号通路。比如TGF家族中至少有两个成员能够调节神经嵴干细胞的分化。近研究发现，胶质细胞衍生的神经营养因子（GDNF）不仅能够促进多种神经元的存活和分化，还对精原细胞的再生和分化有决定作用。GDNF缺失的小鼠表现为干细胞数量的减少，而GDNF的过度表达导致未分化的精原细胞的累积[3]。Wnts的作用机制是通过阻止β-Catenin分解从而Tcf/Lef介导的转录，促进干细胞的分化。比如在线虫卵裂球的分裂中，邻近细胞导的Wnt信号通路能够控制纺锤体的起始和内胚层的分化。   膜蛋白介导的细胞间的相互作用   有些信号是通过细胞-细胞的直接接触起作用的。β-Catenin就是一种介导细胞粘附连接的结构成分。除此之外，穿膜蛋白Notch及其配体Delta或Jagged也对干有重要影响。在果蝇的感觉器官前体细胞，脊椎动物的胚胎及成年组织包括视网膜神经上皮、骨骼肌和血液系统中，Notch信号都起着重要的作用。当Notch与其配体结合时，干细胞进行非分化性增殖；当Notch活性被抑制时，干细胞进入分化程序，发育为功能细胞。   整合素（Integrin）与细胞外基质   整合素家族是介导干细胞与细胞外基质粘附的主要的分子。整合素与其配体的相互作用为干细胞的非分化增殖提供了适当的微环境。比如当β1整合素丧失功能时，上皮干细胞逃脱了微环境的制约，分化成角质细胞。此外细胞外基质通过调节β1整合素的表达和，从而影响干细胞的分布和分化方向。

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