301NK免疫细胞

　　脐带血干细胞及其移植脐带血中含有多种类型的干细胞，主要包括造血干细胞（HSCs)）、间充质干细胞（MSCs）和内皮祖细胞（EPCs)）等。其中，造血干细胞和间充质干细胞在脐带血中含量较多。

　　造血干细胞可分化为所有类型的血细胞；间充质干细胞在一定条件下进行体外培养和诱导可以向神经、成骨、软骨、脂肪、肌腱、肌肉和心肌等细胞方向分化，两者均已广泛应用于临床干细胞移植研究。

　　P B S C 与回输:冻存物自液氮中取出后立即放入42℃水浴箱中，融化后立即回输给患者。细胞活力测定:将待测样本分别于冷冻保存前与复苏后Oh、 3 h 、 6 h 采用台盼蓝拒染法检测细胞存活率(吕 秀 荣 2 0 0 4)。这是没有速控条件下的冷冻方法，简单，易重复操作。但是由于这种降温方式在降温的过程中降温速度不恒定，冷冻保护液选择和其对细胞回收率的影响备受重视。Stiff报道了以6 % 羟乙基淀粉 (H E S )、5 % D M S O 及 4 % 人血清白蛋白(A L B )混合物作为冷冻保护液，用非程控降温将骨髓细胞置于- 8 0 ℃冻存的方法。 Halle等(2004)采 用 1 %H A S + 3 . 5 % H E S + 2 . 5 % D M S O 。张俊萍等将D M S O 、 H E S 、 A L B 和 H A S 按不同比例组成冷冻保护液，发 现 5 % D M S O + 6 % H E S +H A S 效果好。范华骅等研制的C P 8 0 低温保护 液 含 7.5% 右旋糖酐、 6.25% D M S O 和 6.25% A L B ，与样品混合后D M S O 浓 度 为 5 % 。

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　　1994年，通过体外授精和病人捐献的人胚泡处于2-原核期。胚泡内细胞群在培养中得以保存其周边有滋养层细胞聚集 ，ES样细胞位于。1998年美国有两个小组分别培养出了人的多能( pluripotent )干细胞: James A. Thomson在 Wisconsin大学领导的研究小组从人胚胎组织中培养出了干细胞株。他们使用的方法是:人卵体外受精后，将胚胎培育到囊胚阶段，提取 inner cell mass细胞，建立细胞株。经测试这些细胞株的细胞表面 marker 和酶活性，实他们就是全能干细胞。用这种方法，每个胚胎可取得15－20干细胞用于培养。 John D. Gearhart在 Johns Hopkins大学领导的另一个研究小组也从人胚胎组织中建立了干细胞株。他们的方法是:从受精后5－9周人工流产的胚胎中提取生殖母细胞( primordial germ cell )。由此培养的细胞株，实具有全能干细胞的特征。

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　　骨髓应在手术室内行无菌操作。患者在麻或全麻下，用骨髓穿刺针在前、后进行多处穿刺抽取骨髓。抽取骨髓用的注射器应肝素化，控制每毫升骨髓的肝素量为20——40单 位 ，以防形成凝集。外周血造血干细胞的低温保存方法恶 性 血 液 病 患 者 采 用 C M O P 化 疗 联 合 rhG-C S F (每日l〇ng/kg)动 员 ，白细胞升至5xl09 个/L 以上时，采 用 C S -3000 P L U S 血 细 胞 分 离 机 采 集 P B S C ，处理血循环总量7000——16 OOOml(根据患者情况设定)，总 产 品 55——60 ml。

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