广东省人民医院干细胞=广东省人民医院干细胞专家

　　脐血干细胞的保存 婴儿出生后，留在脐带及胎盘内的血就是脐带血。自古以来，这些血被当成废物丢弃，目前采集脐带血的方式是:婴儿出生后，脐带接扎，剪断，婴儿由助产护士、擦洗、包裹、护理的同时，既可从脐带血(体内采集)，也可待胎盘娩出后再采集(体外采集)。两种方法采集量均可在80ml 左右。

　　脐血采集不会对婴儿和母体造成任何不利影响，只是将原来作为废弃物的脐血收集下来。但应注意的一点是，采集后的脐血应于 24 小时之内进行处理，运送过程中应避免紫外线照射及剧烈震荡，以充分保持细胞的活性。保存者应在产前提前与医院及脐血库联络，以保证脐血的及时、顺利采集。

　　P B S C 与回输:冻存物自液氮中取出后立即放入42℃水浴箱中，融化后立即回输给患者。细胞活力测定:将待测样本分别于冷冻保存前与复苏后Oh、 3 h 、 6 h 采用台盼蓝拒染法检测细胞存活率(吕 秀 荣 2 0 0 4)。这是没有速控条件下的冷冻方法，简单，易重复操作。但是由于这种降温方式在降温的过程中降温速度不恒定，冷冻保护液选择和其对细胞回收率的影响备受重视。Stiff报道了以6 % 羟乙基淀粉 (H E S )、5 % D M S O 及 4 % 人血清白蛋白(A L B )混合物作为冷冻保护液，用非程控降温将骨髓细胞置于- 8 0 ℃冻存的方法。 Halle等(2004)采 用 1 %H A S + 3 . 5 % H E S + 2 . 5 % D M S O 。张俊萍等将D M S O 、 H E S 、 A L B 和 H A S 按不同比例组成冷冻保护液，发 现 5 % D M S O + 6 % H E S +H A S 效果好。范华骅等研制的C P 8 0 低温保护 液 含 7.5% 右旋糖酐、 6.25% D M S O 和 6.25% A L B ，与样品混合后D M S O 浓 度 为 5 % 。

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　　用密闭式收集法采集顺产或剖宫产的新生儿的脐带血。孕妇年龄小于3 5 岁 、足月妊娠 、无并发症、产前血液检查H b >90 g/L 、 检 测 HbsA g 、 H C V 、 anti-HIV1/2 抗体、梅 毒 阴 性 。孕 妇 及 丈 夫 均 无 遗 传 性 疾 病 家 族 史 。采用枸橼酸 钠 腺 嘌 呤 保 护 液 (citratephosp 上 ate dextrose adenine， C P D A ) 抗凝的密闭式血袋在胎盘娩出前从脐带断端远离新生儿侧采集。、采集后室温保存， 18 h 内运输至脐带血保存库。

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　　冷冻保护液的添加用 1640培养液将无菌的保护液 (DMS〇 )配 成 20 % 浓 度 ，取与胎肝悬液等体积的2 0 % D M S O , 缓慢加人细胞悬液中，室温静置 10min ，再将样品放入降温仪中。程序降温法:多采用两步或三步降温法，即 开 始 时 从 室 温 以 降 温 ，降至- 3 0 ℃时 ，恒 温 2m i n 后 改 为 5——7℃ /m i n 降至-80℃或- 9 0℃ ， 再转入液氮中 ( - 1 9 6 ℃ ) 长期保存。也有人主张开始降温速度应严格控制在1-3℃ /min，但经过相变(-11—15℃)热释放之后即可加速降温速度，余下各阶段对细胞存活影响不大。

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