核酸提取试剂（磁珠法）使用说明书

　　【产品名称】

　　通用名称:核酸提取试剂（磁珠法）

　　英文名称:nucleic acid extraction kit（Magnetic beads）

　　【包装规格】

　　HRBD-0060  100人份/盒

　　【预期用途】

　　从血清、血浆、淋巴液、尿囊液、精液、唾液、口腔拭子、无细胞体液、细胞培养上清液或各种核酸保存液中提取分离纯化高质量核酸。适用于核酸自动化提取平台。

　　【检验原理】

　　本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统，专为快速、高度敏感，有效的从样本中提取病毒DNA和RNA。以胍盐、表面活性剂和蛋白酶破坏病毒外壳释放核酸在缓冲体系中，加入特殊包被的磁珠，磁珠在缓冲体系下对目的核酸具有很强的亲和力，而当条件改变时，磁珠释放吸附的核酸，洗涤体系可以除去溶液中存在的蛋白、小分子等杂质，能够达到快速分离纯化核酸的目的，且不使用氯仿等有毒试剂。

　　【主要组成成分】

　　※不同批次试剂盒中各组分禁止混用。

　　※实验前，客户应自备异丙醇(分析纯，无菌无RNase污染)30ml

　　【储存条件及有效期】

　　裂解液B未溶解时保存于4~8℃，溶解后保存于-20℃，同时应避免反复冻融；裂解液C保存于-20℃，避免反复冻融；其他成分保存于4～8℃。试剂盒未开封有效期为6个月，开封后应在1个月内用完。

　　【适用仪器】核酸自动提取仪

　　【样本要求】

　　1. 适用标本类型:血清、血浆、淋巴液、尿囊液、精液、唾液、口腔拭子、无细胞体液、细胞培养上清液或其他的液体样本。

　　2. 标本采集:

　　2.1血清——采集2ml静脉血，注入无菌的干燥采血管，禁止使用含有肝素钠或其他抗凝剂的采血管，室温（20~25℃）放置30~60分钟，血液样本可自发凝集析出血清，或使用水平离心机，3000r/min离心5min；吸取上层血清，转移至无菌无RNase离心管内保存。

　　2.2血浆——采集2ml静脉血，注入含EDTA或枸橼酸钠抗凝剂的采血管，立即轻摇采血管混合5~10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5~10分钟后即可分离出血浆，转移至无菌无RNase离心管内保存。

　　2.3淋巴液、尿囊液、精液、唾液、口腔拭子、无细胞体液、细胞培养上清液等样本的采集参考常见医疗样本采集方式，保存于无菌无RNase离心管内待提取。

　　2.4非液体状态含病毒标本——可液化后以液体标本形式使用本试剂盒进行提取。

　　3. 样本保存和运送:经上述处理后的待测样本可立即用于检测，或-20±5℃保存(3个月)，长期保存请置于-70℃以下。应避免反复冻融。标本运送采用冰壶加冰或泡沫箱加冰密封进行运输。

　　【检验方法】

　　1. 裂解

　　取200µl样本到1.5mlEP管中，加入300µl 裂解液 A，10µl裂解液 B，4ul裂解液C，混合均匀（可用漩涡振荡器，1200～1800rpm）。(由于裂解液B和裂解液C用量较少，可以和裂解液A预混为裂解液Mix，每份分装裂解液Mix 314ul)。把离心管置于恒温水箱中56℃温育10min，每隔2~3min，混匀一次。

　　2. 结合

　　将EP管从温育设备中取出，加入振荡混匀的磁珠10µl，加入异丙醇300 µl （自备）；室温下颠倒混匀5min。然后将EP管置于磁力架上进行磁分离，将EP管连同磁力架上下翻转几次，保证管盖上无磁珠残留，开盖，吸弃废液，（吸净管盖及管底残液）。

　　3. 洗涤

　　⑴加入500µl洗涤液Ⅰ，点振5～10次，然后将EP管置于磁力架上进行磁分离，将EP管连同磁力架上下翻转几次，保证管盖上无磁珠残留，开盖，吸弃废液，（吸净管盖及管底残液）；

　　⑵加入500µl洗涤液Ⅱ，点振5～10次（若磁珠有结块现象，加大震荡力度和洗涤时间，尽量使磁珠分散），然后将EP管置于磁力架上进行磁分离，将EP管连同磁力架上下翻转几次，保证管盖上无磁珠残留，开盖，吸弃废液，（吸净管盖及管底残液）。

　　⑶将EP管置于磁力架上，晾干10分钟，根据室内温度和湿度可适当延长或缩短晾干时间。或用无菌风吹干（提取RNA时注意隔绝RNase环境），可有效减少晾干时间。

　　4. 洗脱

　　加入200µl洗脱液，缓慢抽吸混匀，56℃温育10min。每隔2～3min轻摇EP管几下混匀。温育结束后，将离心管置于磁力架上进行磁分离，抽取上层清液保存于新的离心管中，进行下游实验，如不能及时进行下游试验，DNA样本可保存于-20℃，RNA样本可保存于-80℃。

　　【检验方法的局限性】

　　样本检测结果与样本收集、处理、及保存质量有关，其中任何失误都将会导致结果不准确。如果在操作中没有控制好交叉污染，可能出现假阳性结果。

　　【产品性能指标】

　　当样品中甘油三酯浓度≦300mg/dL，胆红素浓度≦10mg/dL，血红蛋白浓度≦200mg/dL，总蛋白≦10g/dL，IgG≦1g/dL浓度时，测试结果的干扰偏差小于±10%。

　　【注意事项】

　　1. 裂解液B管中粉末状固体，初次使用，加入1ml洗脱液溶解，溶解前最好在离心机上短暂离心，以防止瓶壁及盖子上的粉末飞散损失，加入洗脱液后，拧紧瓶盖，充分混匀，必要时可振荡器震荡30S，如未及时用完可-20℃保存，但应避免反复冻融超过3次，可分装使用，以避免反复冻融。

　　2. 将试剂盒从4℃环境下取出使用时，最好在室温条件下静置10min后再加入样本进行实验。

　　3. 如试剂盒内液体不慎溅出接触皮肤和粘膜，立即用大量水冲洗即可。

　　4. 因检测的样本可能含有病毒，虽然经过试剂盒裂解后一般已无生物污染性，但仍需按照有生物污染性对待，使用过的试剂盒预装板及搅拌套要及时安全弃置。

　　5. 为避免试剂被污染，注意使用RNase-free的枪头及离心管，操作人员带双层手套三层口罩，并经常更换，室内减少人员走动。