平板克隆形成

名称:平板克隆形成

供应商:基尔顿生物科技(上海)有限公司

价格:面议

最小起订量:1/孔

地址:上海市长江南路180号长江软件园B区B638室

手机:18017844061

联系人:张艳 (请说在中科商务网上看到)

产品编号:129784586

更新时间:2021-03-17

发布者IP:180.158.156.72

详细说明

  基尔顿生物科技(上海)有限公司成立于2005年,于2012年正式更名为基尔顿生物科技(上海)有限公司,公司位于上海长江软件园,比邻上海复旦大学、常规实验室面积600余平米。

  细胞克隆形成率即细胞接种存活率,表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆,而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。

  基本步骤:

  1、取对数生长期的各组细胞,分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞,并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。

  2、将细胞悬液作梯度倍数稀释,每组细胞分别以每皿50、100、200个细胞的梯度密度分别接种含10mL 37℃预温培养液的皿中,并轻轻转动,使细胞分散均匀。置37℃ 5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2~3周。

  3、经常观察,当培养皿中出现肉眼可见的克隆时,终止培养。弃去上清液,用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定细胞5mL固定15分钟。然后去固定液,加适量GIMSA应用染色液染10~30分钟,然后用流水缓慢洗去染色液,空气干燥。

  4、将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片,用肉眼直接计数克隆,或在显微镜(低倍镜)计数大于10个细胞的克隆数。最后计算克隆形成率。

  克隆形成率 =(克隆数/接种细胞数)×100%   

  平板克隆形成试验方法简单,适用于贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好,不能有细胞团,接种密度不能过大。