内容简介:

　　细胞培养液的储存方法:

　　细胞培养液的储存条件一般为2～8℃、密闭、避光保存，但要注意如下几点:

　　（1）过滤后的完全培养液，即添加了血清、谷氨酰胺、抗生素等的培养液要尽快使用，一般在2～3周内使用完。

　　（2）灭菌后的未加L-谷氨酰胺等添加剂的培养基溶液，一般可在4℃保存6～9个月，也可冷冻保存，用时解冻。

　　（3）高压除菌后的培养基应置4℃保存，不能因为其可耐受高温而忽略储存温度。

　　（4）添加了谷氨酰胺的培养液放置2周后，要补加和原来同样量的谷氨酰胺，但这样并不能消除谷氨酰胺降解产生的游离氨，建议配制好的培养液尽快使用。

　　（5）添加某些生长因子、激素等添加物，可能会改变培养液的储存条件，比如温度、时间等方面的要求。外观  目测外观，应符合2.1的要求。 3.2 pH值  在25℃下用pH计测定细胞保存液的pH值，应符合2.2的要求。 3.3 细胞保存效果  3.3.1 将人体细胞株悬液加到细胞保存液中，使其终浓度为50个细胞/μL，提取保存液中DNA，使用β球蛋白基因引物和HPV通用引物MY09/11扩增后进行琼脂糖凝胶电泳检测，结果显示为有效检出人β球蛋白基因（250bp），且条带位置正确，无HPV基因检出，符合2.3.1的要求。  3.3.2  将插入HPV18型L1基因的Hela细胞悬液加到细胞保存液中，使其终浓度为50个细胞/μL，提取保存液中DNA，使用β球蛋白基因引物和HPV通用引物MY09/11扩增后进行琼脂糖凝胶电泳检测，结果显示为有效检出人β球蛋白基因（250bp）和HPV基因（450bp），且条带位置正确，符合2.3.2的要求。 3.4 批间差  抽取三个批次的细胞保存液，25℃下，分别用pH计测定其pH值，计算最大pH值与最小pH值之差，即ΔpH，应符合2.4的要求。如果是的话,里面的基本成分,可以直接用培养细胞的培养基（通常为DMEM高糖培养基）+10%胎牛血清（FBS）+抗生素.这个混合液再加10%的DMSO（二甲基亚砜）.如果是非常娇贵的细胞可以直接用90%培养基+10%DMSO,冻存后细胞复苏效果更好.

　　其作用:

　　DMSO:能够降低细胞冰点,减少冰晶的形成（因为冻存的时候形成的冰晶都很尖锐锋利,可能会刺穿细胞使其死亡）,减轻自由基对细胞损害.

　　培养基:提供细胞一个基本的缓冲环境（算是对体内环境的模拟）.

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